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【生化诊断原料酶】肌氨酸氧化酶

发布时间:2022-06-21 15:52:32 I 企业名称:武汉瀚海新酶生物科技有限公司I 作者:
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肌氨酸氧化酶

Sarcosine oxidase

Sarcosine + O2 + H2O ⇉

Glycine + HCHO + H2O2

酶学性质

最适pH

 

37℃, buffer solution: pH 6.0-7.5, Na-phosphate; 

pH7.5-9.0, Tris-HCl; pH 9.0-10, Glycine-NaOH.

Enzyme concentration: 1 mg/mL.

 

最适温度

 

5 min-reatcion in Tris-HCl buffer pH 8.0.

Enzyme concentration: 1 mg/mL.

 

pH稳定性

 

37℃ , 60 min-treatment with 100 mM

 buffer solution: 

pH 5.0-6.0, Acetate; pH 6.0-7.5, Na-phosphate; 

pH7.5-9.0, Tris-HCl; pH 9.0-10, Glycine-NaOH. 

 

热稳定性

 

 10 min-treatment with 100 mM

 K-phosphate buffer, pH 7.5.

Enzyme concentration: 1 mg/mL.

稳定性 (-20℃保存)

活性测定方法

原理:肌氨酸氧化酶催化Sarcosine生成H2O2,辣根过氧化物酶催化H2O2与2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠(TOOS)和4-氨基吡啶(4-AA)反应,生成紫色可溶化合物醌亚胺。检测反应液555 nm处吸光度值变化,测定产物生成量。

 

酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下每分钟催化Sarcosine生成1微摩尔H2O2所需的酶量。

 

试剂准备

试剂 I:0.2 M Tris‒HCl缓冲液 (pH 8.0),0.05 ml

            1.0 M Sarcosine底物溶液,0.10 ml

            100 U/ml辣根过氧化物酶溶液,0.025 ml

            15 mM 4‒AA溶液,0.05 ml

            15 mM TOOS溶液,0.05 ml

            去离子水,0.225 ml。

试剂 II:反应终止液,无水乙醇。

试剂 III:酶液,使用10 mM磷酸钾缓冲液 (pH 7.5) 进行稀释。

 

操作步骤

取0.5 ml试剂I 37℃预热5 min,加入试剂III 0.01 mL,混匀,37℃下反应5 min后,加入2.5 mL试剂II 终止反应。使用紫外分光光度计测定反应液在555 nm处吸光度值。

向反应液中加入0.01 mL 10 mM磷酸钾缓冲液(代替试剂III),相同条件下测定吸光度值,设定为空白对照。

 

主要用途:用于临床研究中肌酐酶法检测

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