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【生化诊断原料酶】肌酐酶

发布时间:2022-06-21 15:47:45 I 企业名称:武汉瀚海新酶生物科技有限公司I 作者:
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肌酐酶

Creatinine amidohydrolase

 

 

Creatinine + H2O Creatine

酶学性质

主要用途:用于临床研究中肌酐酶法检测

最适pH

 

37℃, buffer solution: 

pH 6.0-7.5, Na-phosphate; 

pH7.5-9.0, Tris-HCl; pH 9.0-10, Glycine-NaOH.

Enzyme concentration: 1 mg/mL.

 

最适温度

 

10 min-reatcion in K-phosphate buffer pH 8.0.

Enzyme concentration: 1 mg/mL.

 

pH稳定性

 

25℃,120 min-treatment with 100 mM buffer solution:

 pH 5.0-6.0, Acetate; pH 6.0-7.5, Na-phosphate;

 pH7.5-9.0, Tris-HCl; pH 9.0-10, Glycine-NaOH.

Enzyme concentration: 1 mg/mL.

 

热稳定性

 

60 min-treatment with 100 mM 

Tris-HCl buffer, pH 8.0.

Enzyme concentration: 1 mg/mL.

稳定性 (-20℃保存)

活性测定方法

原理:肌酐在肌酐酶催化下生成肌酸,通过检测反应液525 nm处吸光度值变化,测定产物生成量。

 

酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下每分钟催化生成1微摩尔肌酸所需的酶量。

 

试剂准备

试剂 I:磷酸钾buffer,0.3 M,pH 8.0。

试剂 II:肌酐溶液,0.1 M。

试剂 III:碳酸钠溶液,浓度为4%。

试剂 IV:α-萘酚溶液,浓度为2%,溶于无水乙醇中。

试剂 V:碱性溶液,含1.2%氢氧化钠和3.2%碳酸钠。

试剂 VI:二乙酰溶液,浓度为0.05%。

 

操作步骤

1. 取0.1 mL试剂 I与0.8 mL试剂 II在5 mL EP管中混匀,37℃孵育5 min。

2. 加入0.1 mL酶液,37℃孵育10 min。

3. 加入2.0 mL试剂 III,混匀,并将反应EP管置于冰水中。

4. 吸取步骤3中的混合液0.1 ml,依次添加0.9 mL双蒸水,0.5 mL试剂 IV,0.5 mL试剂 V和0.5 mL试剂 VI。

5. 25℃放置1小时,并添加2.5 mL双蒸水稀释。

6. 读取525 nm处吸光度值。

向反应液中加入0.1 mL 10 mM磷酸钾缓冲液(代替酶液),相同条件下测定吸光度值,设定为空白对照。

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