【生化诊断原料酶】肌酸脒基水解酶
肌酸眯基水解酶
Creatine Amidinohydrolase
Creatine + H2O⇉Sarcosine + Urea
酶学性质
![](https://bioupstream.obs.cn-east-3.myhuaweicloud.com/2022/06/2c486c08-cc49-426e-a934-2e04bb91260c.jpg)
![](https://bioupstream.obs.cn-east-3.myhuaweicloud.com/2022/06/62db5367-c748-4539-a7e6-f5c40ba02e68.png)
最适pH
37℃, buffer solution: pH 6.0-7.5, Na-phosphate;
pH7.5-9.0, Tris-HCl.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
![](https://bioupstream.obs.cn-east-3.myhuaweicloud.com/2022/06/9f370906-50ca-42c0-b174-172d2f62d553.png)
最适温度
10 min-reatcion in Na-phosphate buffer pH 7.5.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
![](https://bioupstream.obs.cn-east-3.myhuaweicloud.com/2022/06/55b39956-7859-4108-910b-fa7ef6b2b871.png)
pH稳定性
25℃ , 16 h-treatment with 100 mM buffer solution:
pH 5.0-6.0, Acetate; pH 6.0-7.5, Na-phosphate;
pH7.5-9.0, Tris-HCl.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
![](https://bioupstream.obs.cn-east-3.myhuaweicloud.com/2022/06/f449e5d4-5798-4f0e-87b4-5f559c2f7c66.jpg)
热稳定性
10 min-treatment with 100 mM
K-phosphate buffer, pH 7.5.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
![](https://bioupstream.obs.cn-east-3.myhuaweicloud.com/2022/06/b59a3426-bf26-468c-a3d2-d41b2884b081.png)
稳定性 (-20℃保存)
活性测定方法
原理:肌酸脒基水解酶催化肌酸生成尿素,尿素与对二甲基氨基苯甲醛生成黄色可溶化合物。检测反应液435 nm处吸光度值变化,测定产物生成量。
酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下每分钟催化生成1微摩尔黄色色原所需的酶量。
试剂准备
试剂 I:0.1 M肌酸溶液,(含50 mM 磷酸钠缓冲液,pH 7.5),现用现配。
试剂 II:对二甲基氨基苯甲醛(DAB)溶液,2.0 g DAB溶于100 mL DMSO溶液中,再加入15 mL浓HCl。
试剂 III:酶液,使用50 mM磷酸钾缓冲液pH 7.5稀释到约2-3 U/ml,现用现稀释,冰上存放。
操作步骤
1. 取1 mL试剂 I于5 mL EP管中,37℃预热5 min。
2. 加入试剂 III 0. 1 mL,混匀。
3. 37℃水浴反应10 min后,加入2.0 mL试剂 II终止反应,并在25℃放置20 min。
4. 使用紫外分光光度计,测定反应液在435 nm处吸光度值ODtest。
5. 向反应液中加入0.1 mL 10 mM磷酸钾缓冲液(代替试剂Ⅲ),相同条件下测定吸光度值,设定为空白对照ODblank。
主要用途:用于临床研究中肌酐酶法检测
咨询
- 432
- 点赞
- 复制链接
- 举报