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【生化诊断原料酶】肌酸脒基水解酶

发布时间:2022-06-21 15:56:27 I 企业名称:武汉瀚海新酶生物科技有限公司I 作者:
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肌酸眯基水解酶

Creatine Amidinohydrolase

Creatine + H2OSarcosine + Urea

酶学性质

最适pH

 

37℃, buffer solution: pH 6.0-7.5, Na-phosphate; 

pH7.5-9.0, Tris-HCl.

Enzyme concentration: 1 mg/mL.

 

最适温度

 

 

10 min-reatcion in Na-phosphate buffer pH 7.5.

Enzyme concentration: 1 mg/mL.

 

pH稳定性

 

25℃ , 16 h-treatment with 100 mM buffer solution: 

pH 5.0-6.0, Acetate; pH 6.0-7.5, Na-phosphate;

 pH7.5-9.0, Tris-HCl.

Enzyme concentration: 1 mg/mL.

 

热稳定性

 

 10 min-treatment with 100 mM 

K-phosphate buffer, pH 7.5.

Enzyme concentration: 1 mg/mL.

稳定性 (-20℃保存)

活性测定方法

原理:肌酸脒基水解酶催化肌酸生成尿素,尿素与对二甲基氨基苯甲醛生成黄色可溶化合物。检测反应液435 nm处吸光度值变化,测定产物生成量。

 

酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下每分钟催化生成1微摩尔黄色色原所需的酶量。

 

试剂准备

试剂 I:0.1 M肌酸溶液,(含50 mM 磷酸钠缓冲液,pH 7.5),现用现配。

试剂 II:对二甲基氨基苯甲醛(DAB)溶液,2.0 g DAB溶于100 mL DMSO溶液中,再加入15 mL浓HCl。

试剂 III:酶液,使用50 mM磷酸钾缓冲液pH 7.5稀释到约2-3 U/ml,现用现稀释,冰上存放。

 

操作步骤

1. 取1 mL试剂 I于5 mL EP管中,37℃预热5 min。

2. 加入试剂 III 0. 1 mL,混匀。

3. 37℃水浴反应10 min后,加入2.0 mL试剂 II终止反应,并在25℃放置20 min。

4. 使用紫外分光光度计,测定反应液在435 nm处吸光度值ODtest。

5. 向反应液中加入0.1 mL 10 mM磷酸钾缓冲液(代替试剂Ⅲ),相同条件下测定吸光度值,设定为空白对照ODblank。

 

主要用途:用于临床研究中肌酐酶法检测

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