NGS&生物信息学分析
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- 2023-03-02 10:53:35
四川阿帕克生物科技有限公司
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传统的获得纳米抗体序列是通过panning后挑克隆进行验证与sanger 测序，这种方法通量与克隆分析深度受到很大的限制。高通量DNA测序技术（NGS）为分析纳米抗体基因序列，特别是针对大容量，多样性高的纳米抗体库的分析提供了可能。纳米抗体只有重链，不涉及轻重链的搭配，且片段一般在400bp左右，目前的NGS测序完全能满足要求。
NBbiolab采用 Illumina MiSeq 平台进行测序，测序长度 2×300bp进行分析，对测序得到的原始数据（Raw reads）进行质量控制，数据拼接，过滤掉质量低与长度短的片段获得干净的数据（Clean reads）；利用IgBlast 和IMGT 对抗体的可变进行VDJ基因定位(VDJ annotation),对纳米抗体进行丰度统计，并按照丰度自高至低排序。最后挑取序列进行基因合成，通过实验验证功能。
