酵母表面展示
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- 2023-03-02 10:37:00
四川阿帕克生物科技有限公司
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酵母表面展示（Yeast surface display）技术广泛用于抗体文库筛选、抗体体工程等领域。NBbiolab纳米抗体研发中心积累多年抗体发现技术经验，成熟高效的酵母展示、筛选系统平台，为客户高效的发现高亲和力、高稳定性的纳米抗体。NBbiolab是目前国内唯一能提供Yeast display高通量发现纳米抗体服务的高新技术企业。
技术原理
将纳米抗体DNA序列插入至含有蛋白质支架-Aga2基因的展示质粒载体中，该载体使用营养标记物在酵母中维持选择性生长。通过培养基中加入半乳糖诱导酵母进行表面展示，再结合磁珠及FACS分选技术进行多轮筛选，可得到高亲和力、高稳定性的克隆。
Fig.1. Yeast display 原理与流程
技术优势
Yeast display 与 Phage display 相比，酵母表面展示具有以下显著优势：
1、酵母具有类似于高等真核生物的分泌途径， 蛋白质折叠在内质网中，其中伴侣蛋白，折叠酶和质量控制机制确保仅分泌正确折叠的蛋白质。而噬菌体是原核系统，有些抗体对大肠杆菌有毒的克隆，其生长缓慢甚至不生长，导致文库的偏向与克隆的丢失。
2、通过噬菌体展示筛选更高亲和力的抗体时，通常会受到筛选处理过程的不利影响，不仅取决于亲和力，还取决于抗体表达水平。而酵母展示系统采用FACS分选技术，基于抗体亲和力及展示水平进行筛选，因此消除了表达引起的偏差，且能区分相差很小亲和力的克隆。
3、酵母展示是多价展示，能够一次通过Sorting直接分选高，中&低亲和力的克隆，非常方便
4、通过使用双染色的 FACS，可以直接在酵母细胞表面上确定抗体亲和力，从而无需耗时的亚克隆、表达和纯化。
5、抗体筛选速度快，3min即可完成10万个细胞的分选，获得100+的unique sequence 候选克隆。
6、在相同的展示系统下可对抗体的亲和力和稳定性进行优化。
参考文献
1.McMahon, C., Baier, A.S., Pascolutti, R.et al.Yeast surface display platform for rapid discovery of conformationally selective nanobodies.Nat Struct Mol Biol 25, 289–296 (2018) doi:10.1038/s41594-018-0028-6
2.Uchański, T., Zögg, T., Yin, J.et al.An improved yeast surface display platform for the screening of nanobody immune libraries.Sci Rep9,382 (2019) doi:10.1038/s41598-018-37212-3
3.Zhuo Yang,Yue Wan.et al.A cell–cell interaction format for selection of high-affinity antibodies to membrane proteins.PNAS July 23, 2019 116 (30) 14971-14978. doi.org/ 10.1073/pnas.1908571116
