一氧化氮（NO）测定试剂盒（硝酸还原酶法）比色法
- BPC003
- bpro
- 上海市
- 一周内
- 50T盒
- 450 元
- 2022-08-15 15:44:01
上海朗顿生物科技有限公司
1.原理
一氧化氮(Nitric Oxide，NO)，是一种非常重要的生理性的细胞内及细胞间的信号分子，在免疫、神经及 循环等系统中起着重要作用。一氧化氮化学性质活泼，体内代谢转化为硝酸盐（NO3- ）和亚硝酸盐（NO2-)，此两种浓度之和（NO3-+ NO2-）才能准确代表NO水平。本法利用硝酸还原酶特异性将NO3-还原为NO2- ，通过显色反应测定其浓度的高低。本测试法灵敏、简便且较稳定，可用于血清、组织匀浆、细胞及细胞培养液、腹水、胸水、脑脊液、胃液、尿液等样本的NO 浓度测定。
2.测定意义
NO（NitricOxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等 系统中，特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
3.测试所需仪器设备
可见光分光光度计,恒温水浴锅,离心机, 漩涡混匀器，精密移液器。
4.试剂及配置
|
试剂 |
25T |
50T |
|
|
试剂1：标准品贮存液（10mmol/L） |
0.1ml*1支,用时稀释到100μmol/L，现配先用 |
0.1ml*1支,用时稀释到100μmol/L，现配先用 |
|
|
试剂1 |
6ml*1瓶 |
12ml*1瓶 |
|
|
试剂2 |
冻干粉*1瓶，测定时用双蒸水定容到3ml |
冻干粉*1瓶，测定时用双蒸水定容到6ml |
|
|
试剂3 |
冻干粉*1支，用时加入300ul双蒸水，漩涡混匀。避光-20℃可保存1个月 |
冻干粉*1支，用时加入600ul双蒸水，漩涡混匀。避光-20℃可保存1个月 |
|
|
试剂4 |
6ml*1瓶 |
12ml*1瓶 |
|
|
试剂5 |
3ml*1瓶 |
6ml*1瓶 |
|
|
试剂6 |
7.5ml*1瓶 |
15ml*1瓶 |
|
|
试剂7 |
7.5ml*1瓶 |
15ml*1瓶 |
5. 操作步骤
（1）血清（浆）及体液的操作步骤
|
空白管 |
标准管 |
测定管 |
|
|
双蒸水（ml） |
0.1 |
||
|
10umol/L标准品（ml） |
0.1 |
||
|
样本（ml） |
0.1 |
||
|
试剂1（ml） |
0.2 |
0.2 |
0.2 |
|
试剂2（ml） |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
|
试剂3（μl） |
10 |
10 |
10 |
|
混匀，37℃反应1h |
|||
|
试剂4 |
0.2 |
0.2 |
0.2 |
|
试剂5 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
|
充分漩涡混匀30S，4000r/min离心 5min，取上清液显色
|
|||
|
上清（ml） |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
|
显色剂A |
0.25 |
0.25 |
0.25 |
|
显色剂B |
0.25 |
0.25 |
0.25 |
混匀，静置10分钟，蒸馏水调零，540nm，0.5cm光径，测定各管吸光值
|
注意：1.室温较低时，所有的试剂均应置于37预热5 分钟。 |
|
2.取上清时，如果上清量不够，请延长离心时间，或者少取一点。例如：可取0.4或0.45ml，但同一批实验所有的管子都应取上清的量要一致，千万不可将沉淀吸上。 （2）组织样本的操作步骤 空白管标准管测定管双蒸水（ml）0.50.4 10umol/L标准品（ml） 0.1 样本（ml） 0.5试剂1（ml）0.20.20.2试剂2（ml）0.10.10.1试剂3（μl）101010混匀，37℃反应1h试剂40.20.20.2试剂50.10.10.1充分漩涡混匀30S，4000r/min离心 5min，取上清液显色上清（ml）0.80.80.8显色剂A0.250.250.25显色剂B0.250.250.25 |
混匀，静置10分钟，蒸馏水调零，540nm，0.5cm光径，测定各管吸光值
