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一氧化氮(NO)测定试剂盒(硝酸还原酶法)比色法
  • BPC003
  • bpro
  • 上海市
  • 一周内
  • 50T盒
  • 450
  • 2022-08-15 15:44:01

上海朗顿生物科技有限公司

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1.原理

一氧化氮(Nitric Oxide,NO),是一种非常重要的生理性的细胞内及细胞间的信号分子,在免疫、神经及 循环等系统中起着重要作用。一氧化氮化学性质活泼,体内代谢转化为硝酸盐(NO3- )和亚硝酸盐(NO2-),此两种浓度之和(NO3-+ NO2-)才能准确代表NO水平。本法利用硝酸还原酶特异性将NO3-还原为NO2- ,通过显色反应测定其浓度的高低。本测试法灵敏、简便且较稳定,可用于血清、组织匀浆、细胞及细胞培养液、腹水、胸水、脑脊液、胃液、尿液等样本的NO 浓度测定。

2.测定意义

NO(NitricOxide,NO)广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等 系统中,特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质,发挥信号传递的作用,是一种新型的生物信使分子,在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。

3.测试所需仪器设备

可见光分光光度计,恒温水浴锅,离心机, 漩涡混匀器,精密移液器。

4.试剂及配置

试剂

25T

50T

 

试剂1:标准品贮存液(10mmol/L)

0.1ml*1支,用时稀释到100μmol/L,现配先用

0.1ml*1支,用时稀释到100μmol/L,现配先用

 

试剂1

6ml*1瓶

12ml*1瓶

 

试剂2

冻干粉*1瓶,测定时用双蒸水定容到3ml

冻干粉*1瓶,测定时用双蒸水定容到6ml

 

试剂3  

冻干粉*1支,用时加入300ul双蒸水,漩涡混匀。避光-20℃可保存1个月

冻干粉*1支,用时加入600ul双蒸水,漩涡混匀。避光-20℃可保存1个月

 
 
 

试剂4

6ml*1瓶

12ml*1瓶

 

试剂5

3ml*1瓶

6ml*1瓶

 

试剂6

7.5ml*1瓶

15ml*1瓶

 

试剂7

7.5ml*1瓶

15ml*1瓶

 

5. 操作步骤

(1)血清(浆)及体液的操作步骤

 

空白管

标准管

测定管

双蒸水(ml)

0.1

   

10umol/L标准品(ml)

 

0.1

 

样本(ml)

   

0.1

试剂1(ml)

0.2

0.2

0.2

试剂2(ml)

0.1

0.1

0.1

试剂3(μl)

10

10

10

混匀,37℃反应1h

试剂4

0.2

0.2

0.2

试剂5

0.1

0.1

0.1

充分漩涡混匀30S,4000r/min离心   5min,取上清液显色

 

 

上清(ml)

0.5

0.5

0.5

显色剂A

0.25

0.25

0.25

显色剂B

0.25

0.25

0.25

混匀,静置10分钟,蒸馏水调零,540nm,0.5cm光径,测定各管吸光值

注意:1.室温较低时,所有的试剂均应置于37预热5 分钟。

      2.取上清时,如果上清量不够,请延长离心时间,或者少取一点。例如:可取0.4或0.45ml,但同一批实验所有的管子都应取上清的量要一致,千万不可将沉淀吸上。

(2)组织样本的操作步骤

 空白管标准管测定管双蒸水(ml)0.50.4 10umol/L标准品(ml) 0.1 样本(ml)  0.5试剂1(ml)0.20.20.2试剂2(ml)0.10.10.1试剂3(μl)101010混匀,37℃反应1h试剂40.20.20.2试剂50.10.10.1充分漩涡混匀30S,4000r/min离心     5min,取上清液显色上清(ml)0.80.80.8显色剂A0.250.250.25显色剂B0.250.250.25

混匀,静置10分钟,蒸馏水调零,540nm,0.5cm光径,测定各管吸光值

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