产品概述

    为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或当地的销售人员（联系方式见附录）。

 

1.产品介绍

IgM Focurose HP纯化原理是利用电子供体和电子受体之间的相互作用（高盐加强、低盐减弱）来分离纯化生物分子，适用于分离纯化杂交瘤细胞培养上清的单克隆抗体或人IgM。

特点：

a.快速、简单（一步纯化）。

b.载量高、流速快、易于放大。

 

表1：介质性能参数

基质	高度交联6%的琼脂糖
粒径范围	25-45um
平均粒径	35±5um
结合载量*	≧5mg(人IgM)/ml(介质)
pH稳定性	3-11(长期) 2-13(短期)
化学稳定性	所有常用缓冲溶液中稳定 30%异丙醇、70%乙醇、1M醋酸、0.5M NaOH
流速	≥150cm/h
操作压力	≤0.3MPa
贮存溶液	20%乙醇
贮存温度	4-8℃

*.介质的结合载量会因样本的来源的变化而变化。

 

2.溶液制备

平衡液：0.02M PB、0.8M (NH4)2SO4，pH 7.5。

洗脱液：0.02M PB，pH 7.5。

再生液：0.02M PB、30%异丙醇，pH 7.5。

备注：当结合效果不佳时，可以提高平衡液中(NH4)2SO4浓度或更换为0.5M K2SO4。

 

3.样品制备

3.1样品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液进行稀释、透析/超滤/G25进行缓冲液置换。

3.2样品过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用   0.8µm过滤）。

 

 

4.纯化流程（以XK16/10为例）

4.1采用液滴对液滴（避免引入气泡）的方式将柱子连接到层析系统上。

4.2用纯化水以5ml/min的流速冲洗5个CV。

4.3用平衡液以5ml/min的流速冲洗5个CV。

4.4用再生液以5ml/min的流速冲洗5个CV。

4.5用平衡液以5ml/min的流速冲洗5个CV。

4.6将样品以5ml/min的流速上样。

4.7用平衡液以5ml/min的流速冲洗至紫外吸收值平稳（15个CV）。

4.8用洗脱液以5ml/min的流速冲洗至紫外吸收值平稳（15个CV）。

4.9用再生液以5ml/min的流速冲洗10个CV。

4.10用纯化水以5ml/min的流速冲洗10个CV。

4.11用保存液以5ml/min的流速冲洗5个CV。

 

5.常见问题

表2：常见问题及解决方案

问题	可能原因	解决方案
纯化时目标物不与介质结合 或结合量较低	1.上样量过载	降低上样量
	2.上样流速过快	降低上样流速
	3.目标物和介质结合力弱	增加平衡液中(NH4)2SO4浓度
洗脱时没有收集到目标物 或只收集到少量目标物	1.目标物没有与介质结合或结合量较少	先确认目标物是否与介质结合
	2.洗脱时间不够	降低流速，延长洗脱液的保留时间
	3.洗脱体积过小	加大洗脱体积
目标物纯度较低	1.样品没有经过前处理	上柱前必须要经过过滤
	2.样品粘度过高	用平衡液适当的稀释样品，降低样品粘度和浓度。
	3.洗杂不彻底	加大洗杂体积直至基线平稳并与平衡液一致
	4.杂质蛋白或脂类在介质中聚集沉淀	及时有效地清洗介质
	5.柱料装填效果不佳	重新装填或购买
	6.分离柱顶部有较大储样体积	重新装柱或降低储样体积
	7.介质中有微生物生长	介质使用完后，请及时正确保存介质
介质载量下降	1.上样流速过快	降低上样流速
	2.蛋白或脂类在介质中聚集，导致载量下降	及时清洗介质
	3.使用次数过多，配基逐渐脱落	更换新介质
色谱峰上升过陡	介质装填过紧	重新装柱
色谱峰上升过缓或拖尾	介质装填太松	重新装柱
柱床有裂缝或干涸	出现泄露或大体积气泡引入	检查管路是否有泄露或气泡，重新装柱
液流较慢	1.蛋白或脂类聚集	及时清洗介质或滤膜
	2.分离柱中微生物生长	所用试剂必须经过过滤和脱气； 样品上柱前必须离心或过滤

 

6.订购信息

表3：订购信息表

产品	规格	货号
IgM Focurose HP	25ml	HQ060218025M
IgM Focurose HP	100ml	HQ060218100M
IgM Focurose HP	500ml	HQ060218500M
IgM Focurose HP	1L	HQ060218001L
IgM Focurose HP	5L	HQ060218005L
IgM Focurose HP	20L	HQ060218020L

备注：大规格包装产品或其它产品购买，请咨询本公司当地销售或售前技术支持。