产品概述

    为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司技术支持或当地的销售人员。

    MMC Focurose HPL是一种多模式耐盐生物分离介质，适用于蛋白、多肽、核酸等所有带电的生物分子的中度纯化和精细纯化。

 

产品

图1：MMC Focurose HPL的配基是一种多模式配基，它与目标分子存在许多类型的相互作用，主要是离子作用，其次是氢键作用和疏水作用等。

 

特点：

a.在高电导条件下结合带电分子，样本不再受电导的限制，样本不需要前处理就可进行离子交换。

b.处理样本体积大。

c.和传统离子交换介质相比，具有新的选择性。

d.大孔径。

表1：MMC Focurose HPL 性能参数

名称	MMC Focurose HPL
基质	高刚性琼脂糖
粒径范围	45-165µm
平均粒径	≈75µm
介质类型	复合模式
离子载量	80-120umol H+/ml 介质
pH稳定性	2-14（短期）3-12（长期）
操作压力	≤0.3MPa
最大流速	300cm/h
化学稳定性	所有常用缓冲液、1.0M氢氧化钠、8M尿素、6M盐酸胍、70%乙醇 避免使用氧化剂、阳离子去污剂、阳离子缓冲液
贮存溶液	20%乙醇
贮存温度	4-30℃

 

1 选择指导

2.1 离子交换介质的选择

图2：离子交换介质的选择

 

说明：

a.当目标物所在溶液的pH˂目标物的等电点时，选择阳离子交换介质。

b.当目标物所在溶液的pH˃目标物的等电点时，选择阴离子交换介质。

c.所使用溶液的pH应该在离子交换介质的使用pH范围以内。

2.2 缓冲溶液的选择

表2：推荐缓冲液

pH范围	缓冲盐1	浓度2（mM）
4.0-5.5	Acetate	20-100
3.0-6.5	Citrate	20-200
5.5-6.5	Bis-Tris	20-50
6.0-7.5	Phosphate	20-200
7.5-9.0	Tris	20-50
8.8-10.6	Glycin-NaOH	20-100

 

说明：

a.选择的缓冲液和盐可能会干扰性能。

b.电导调节可以通过添加盐或改变缓冲液的浓度。

c.在溶液配制后，须经过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用0.8µm过滤）和脱气处理（超声或负压）。

 

3 样品的制备

样品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液稀释或透析/超滤/G25进行缓冲液置换。

样品过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用   0.8µm过滤）。

 

4 纯化流程（以XK16/10为例）

采用液滴对液滴（避免引入气泡）的方式将柱子连接到层析系统上。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗5CV（CV指柱床体积，下同）。

用洗脱液以5ml/min的流速冲洗5CV。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗10CV。

将样品以5ml/min的流速上样。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗10CV。

用洗脱液以5ml/min洗脱5CV或20CV(根据前期筛选实验数据，采用阶梯式洗脱5CV/线性梯度洗脱20CV)。

用再生液以5ml/min的流速冲洗5CV。

备注：再生液=平衡液+2M NaCl，其它组分不变。

 

5 放大

保持柱床高度不变

5.2 保持线性流速不变

备注：若实际情况和实验室数据有偏差，可以维持停留时间不变。

 

6 维护

6.1平衡

柱子装填完成后，用平衡液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。

6.2再生

每次分离纯化后，用再生液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。

6.3在位清洗

在位清洗用于清洗再生没有清洗干净的物质，例如脂类、沉淀物、变性蛋白。

a.强离子结合蛋白

用2.0M NaCl以60cm/h的流速反向冲洗5CV。

b.沉淀物、疏水结合蛋白、脂蛋白

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。

c.脂类、强疏水蛋白。

用1.0M NaOH，30%异丙醇以30cm/h的流速反向冲洗5CV

6.4消毒

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。

6.5灭菌

将介质置换到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中进行高压灭菌。

6.6保存

介质在20%乙醇中4-30℃保存。

 

7 订购信息

表3：订购信息表

产品	规格	货号
MMC Focurose HPL	25ml	HL220305025M
MMC Focurose HPL	100ml	HL220305100M
MMC Focurose HPL	500ml	HL220305500M
MMC Focurose HPL	1L	HL220305001L
MMC Focurose HPL	5L	HL220305005L
MMC Focurose HPL	20L	HL220305020L

备注：大规格包装产品或其它产品购买，请咨询本公司当地销售或售前技术支持。