肿瘤干细胞是是一群既具有自我更新能力又具有较强的侵袭迁移的细胞，对肿瘤的存活、增殖、转移及复发有着重要作用。肿瘤细胞的成球实验（成球大小及数目）是衡量肿瘤细胞干性的金标准。

成球能力是肿瘤干细胞体外鉴定的一个重要方法。其判断的是单个细胞在合适的条件培养基中自我更新的能力，一般用细胞球形成效率（Sphere Formation Efficiency，SFE）表示。

SFE的计算方法：SFE=每孔中直径大于75um的细胞球的个数 / 每孔中原始接种细胞的总数

通常情况下，需要检测细胞连续传代后的自我更新能力，此时就需要进行细胞球的传代。方法是，70μm的细胞筛收集培养10-14天后的细胞球，使用胰酶消化成单细胞，将合适数量的细胞铺入96孔板继续进一步培养10-14天，统计细胞球的个数，计算SFE。

实验步骤

01 一次成球

1. 将状态良好的细胞消化后离心收集，去除含血清培养基。
2. PBS清洗细胞2次。
3. 细胞计数，用超低吸附的细胞培养板培养细胞（6孔板中每孔加入大约1000个细胞）。
4. 培养大约10天，观察细胞成球情况并计算SPF。

02 二次成球

1. 70μm的细胞筛过滤收集细胞球，胰酶消化。
2. 无血清培养基终止消化，PBS清洗细胞2次。
3. 重悬细胞，计数。
4. 用超低吸附的细胞培养板培养细胞（6孔板中每孔加入大约1000个细胞）。
5. 培养大约10天，观察细胞成球情况并计算SPF。

   Hisham F. Bahmad,，Katia Cheaito,1，Reda M. Chalhoub，etal. 2018

   标尺100 μm