基因敲入细胞定制
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- 上海睿远生物
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- 2022-05-05 16:52:09
上海睿远生物医药科技有限公司
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基因敲入细胞定制
技术简介
利用CRISPR/Cas9技术，针对靶基因设计，构建相应的Cas9/sgRNA和Donor质粒，将Cas9/sgRNA和Donor质粒共转染目的细胞，通过sgRNA引导Cas9核酸酶对目的基因靶位点进行切割，引起DNA双链断裂（Double-strand breaks DSB),通过细胞自身的同源重组修复（Homology -directed repair HDR)途径，将Donor中的外源基因定点敲入到目的细胞的基因组中。
应用范围
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可在指定基因位点敲入外源目的基因，避免因随机整合带来的多位点插入，表达不稳定，基因破坏等问题
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通过该方法可在内源基因N或C端定点引入外源报告基因，实现内源基因的示踪。
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方案选择
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拥有多种荧光筛选标记，结合流式分选，可提高获得阳性目的细胞概率
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在细胞不产生耐药的情况下，可提供多种药筛标签，满足不同实验需求
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应用案例
19-28z（CAR）片段敲入TRAC位点目的细胞株的构建（引自：Eyquem J,et al., Nature ,2017)。
利用CRISPR/Cas9技术，用病毒感染目的细胞，将病毒中包含的目的序列（19-28z)整合入TRAC基因组中，19-28z受TRAC内源启动子调控，可以转录翻译成CAR蛋白，同时19-28Z敲入阻断TRAC转录翻译成TCR蛋白。通过流式分选，筛选CAR表达阳性且TCR表达阴性的细胞，得到19-28z（CAR)片段敲入的目的细胞株。
项目流程与周期
交付标准
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3
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按指定方案构建的目的基因编辑细胞株，每个目的细胞株交付基因型正确的2个克隆，每个克隆2支冻存细胞（1*10 cells/支）
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对应野生型对照细胞
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项目报告及质检报告
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