I 简介

肝星形细胞占肝脏细胞的比例相对较低，呈梭形或多边形，胞浆内有多个富含维生素A的脂滴。在正常肝脏中，星状细胞处于静止状态，表达marker基因Desmin，增殖活性低。依靠本公司在原代肝脏细胞分离与纯化上的技术优势，大鼠原代肝星形细胞分离自SPF级大鼠，来源清晰，细胞活力高（>85%），细胞纯度高（>90%），性价比高，可广泛应用于基础生命科学研究以及药物研发中。公司可个性化定制原代细胞，可分离不同品系、不同药物处理（如CCl4）的细胞，满足不同客户的需求。

II  试剂与材料

-冻存大鼠原代肝星形细胞（Cat# LV- HSC002）            

-肝星形细胞培养基（DMEM+10% FBS+1%PS）

-无菌15ml离心管（冰上预冷）                          

-宽口移液枪头（普通移液枪头剪去尖头，再灭菌使用）    

-生物安全柜   

-移液枪                                          

-恒温水浴锅（38℃预热）                  

-冷冻离心机             

-37℃/5%CO₂培养箱

-75%酒精

III 细胞的复苏与铺板

• 将所有试剂耗材至于生物安全柜中，紫外消毒15min；预冷离心机；铺板培养基放入38℃恒温水浴锅中充分预热。
• 将冻存的肝星形细胞从冷藏位置迅速转移至38℃恒温水浴锅中，尽可能多的浸入38℃水中，顺时针水平摇动，但必须确保冻存管盖子保持在水面以上。
• 解冻冻存管约90 ~120s，至冻存管中只有少量碎冰漂浮即可。
• 600×g，4℃离心5min。
• 利用75%酒精消毒冻存管，并将其转移到生物安全柜，去上清并用肝星形细胞培养基重悬。
• 沉淀的细胞用星形细胞专用培养基重悬并定容至4ml，用台盼蓝排除法测定星形细胞的存活率和细胞总量。
• 将细胞以2×10⁴cells/cm²的密度接种至培养皿中，摇匀，在37℃/5%CO₂培养箱中培养，24h后换液，之后隔天换液。

IV 肝星形细胞培养与传代

• 通常情况下，我司不建议客户对细胞进行传代，因为传代细

胞可能会丢失部分细胞特性。

• 如需要传代培养，在本培养体系中，细胞在铺板培养后第7-8天可传代，细胞可检测到肝星形细胞标记基因Desmin及a-SMA的表达。客户可根据实验需求加以考虑。
• 肝星形细胞可制备成永生化细胞，满足部分基础实验研究。