I 简介

立沃生物科技是一家专注于原代肝细胞分离、培养、冻存与再生的国家高新技术企业。超低吸附细胞培养板/皿/瓶底附着与表面共价键结合的水凝胶，能最大限度地减少细胞附着、细胞活化、蛋白质吸收和酶活化；该水凝胶对细胞无毒性作用；可用于细胞非贴壁培养、类器官、圆球体等培养物。

II  试剂与材料

-超低吸附细胞培养板/皿/瓶                                      

-细胞培养液

-移液枪头

-自动移液枪

-恒温水浴锅                                    

-生物安全柜

-37^oC/5%二氧化碳培养箱

III预处理（紧急情况下，此步骤可忽略）

• 将超低吸附细胞培养板/皿/瓶外包装70-75%酒精消毒后，迅速置于生物安全柜中，撕开外包装取出培养板/皿/瓶，放置备用。
• 紫外消毒15分钟（紧急情况下，此步骤可忽略）。
• 针对96U型底培养板，请用显微镜观察培养孔包被是否完整，如出现包被层不均匀、有残缺，可能影响细胞的成球效果。如出现大于5%孔有残缺，请第一时间联系销售经理作售后处理。

IV 细胞悬液的加入和培养

• 准备好所培养的细胞悬液。
• 按需将细胞悬液沿孔壁加入预处理过的超低吸附细胞培养板/皿/瓶中。
• 铺板密度推荐

间充质干细胞：3*10⁴个活细胞/cm²

血管内皮细胞：3*10⁴个活细胞/cm²

Huh7/HepG2：96U型底，1000个活细胞/孔

细胞类型不同，细胞成团的密度不同，需要研究

者自行摸索最佳密度。

• 用细胞培养液补至总体积到推荐培养液量（见附表）。注意：切记不能剧烈摇动培养板/皿/瓶，或者震荡培养，会破坏超低吸附水粘胶，导致细胞无法成团。
• 将加好细胞的培养板置入37°C / 5%二氧化碳培养箱中培养，一般情况下12小时开始可成团，不同细胞类型可能成团时间不同，建议成团时间控制在12-96小时之间。如细胞已经成团，延长培养时间可能导致形成大团或者管状细胞团，建议研究者根据具体情况转移细胞团，避免该情况发生。
• 48小时换液，可采用半量换液，即取出一半培养基，加入一半新鲜培养基。

注意：不建议重复利用培养板/皿/瓶。