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MGB荧光探针法SNP分型试剂盒(rs12979860)
  • FYG-rs12979860
  • 弗元生物 Fuyuanbio
  • 上海市
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  • 2022-07-21 16:18:33

弗元(上海)生物科技有限公司

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MGB荧光探针法SNP分型试剂盒(rs12979860)

货号

规格

目录价

活动价

FYG-rs12979860-500T

10ul×500

2000

-

FYG-rs12979860-1000T

10ul×1000

3600

3420

FYG-rs12979860-2000T

10ul×2000

6400

5760

产品编号:

FYG-rs12979860-500T

FYG-rs12979860-1000T

FYG-rs12979860-2000T

存储条件:

2-8 ℃ 保存,有效期1周;

-20 ℃保存,有效期6个月;

避免反复冻融。

产品组分:

编号

名称

500T

1000T

2000T

A

RealFAST ProbePCR mix

1.3 ml×2

1.3 ml×4

1.3 ml×8

B

Primer & Probepremix

0.5 ml×1

0.5 ml×2

0.5 ml×4

C

Lo-ROX50×)

0.1 ml×1

0.2 ml×1

0.4 ml×1

D

ddH2O

1 ml×2

1 ml×3

1 ml×6

产品简介:

本产品是基于Taqman MGB探针法开发的SNP分型试剂盒。该试剂盒具有灵敏度高、区分度高、可重复性高、抗干扰性强等特点。试剂盒包含RealFAST Probe PCR mix Lo-ROXPrimer & Probe premix ddH2OSNP分型所需的所有试剂,无需另外准备配套试剂,具有操作简便、分析简单、结果可靠等优点。

自备耗材和设备:

移液器2 μl10 μl100 - 200 μl

冰盒;

荧光定量PCR管;

实时荧光定量PCR仪。

反应设置与操作过程:

1. 探针分型:

FAM标记T型;VIC标记C型。

 

 

 

 

2. 反应体系:

PCR反应体系(10 μl):

 

名称

体积(μl

RealFAST Probe PCR mix

5

Primer & Probe premix

1

Lo-ROX50×

按机器品牌与型号添加

DNA

110 - 40 ng

ddH2O

补足至10 μl

仪器型号对Lo-ROX添加的要求:

仪器

终浓度

ABI PRISM 7000 /7300 /7700 /7900HT /Step One

5×(即:Lo-ROX 1μl /10μl体系)

ABI 7500 /7500 Fast

Stratagene Mx3000P /Mx3005P /Mx4000

1×(即:Lo-ROX 0.2μl /10μl体系)

Roche仪器;

Bio-Rad仪器;

Eppendorf仪器

无需添加

反应条件:

     

项目

温度

时间

循环数

预变性

95 ℃

5 min

1

变性

95 ℃

10 sec

40

退火/延伸

60 ℃

30 sec*

           

注:*处进行荧光信号采集。

3. 操作过程:

3.1          试剂准备:试剂盒从-20℃冰箱取出,室温融化;涡旋仪混匀,瞬时离心待用。

3.2          用量计算:根据需要检测的样本数n,配置n+4个反应体系混合液。即5×(n+1)μl RealFAST Probe PCR mix(n+1)μl Primer&Probe premix rs12979860)、0.2×(n+1)μl Lo-ROX50×)、2.8×(n+1)μl ddH2O。(若反应数较大,可适当多增加几个反应。

3.3          反应混合液配制:将上述计算的用量按次序用移液器加入同一新鲜干净的EP管中,涡旋仪混匀,瞬时离心。(若反应数较大,可选用较大EP管。请务必旋窝充分混匀!

3.4          添加反应混合液:按照每孔9μl的量将配置好的反应体系分装至八联排(96孔板)。

3.5          添加模版:1μl已经定量并稀释至10-40 ng/μl DNA模板加入分装的反应体系中。

3.6          添加质控:三种质控质粒中各取μl分别加入到反应体系中,构成三个阳性质控(可选);加入1 μl ddH2O与另一反应体系中,构成阴性质控。

3.7          瞬时离心:八联排(96孔板)盖上管盖(或封膜),瞬时离心,使DNA模板与反应体系混合并处于管底。(请务必进行瞬时离心,否则可能出现无扩增的结果!

3.8          上机:将八联排(96孔板)放入ABI7500PCR仪,根据反应条件设置ABI 7500软件,开机运行。(请根据选用的机型进行相关设置。

3.9          特别说明:配置体系过程中,需要戴一次性乳胶手套(PE手套);避免接触管盖(或封膜),防止污染,导致荧光信号不准确。阳性质控质粒拷贝数极高,应严格规范操作,防止交叉污染。

注:操作请在冰盒上进行。

 

常见问题:

 1. 存储条件与反复冻融如何选择?

该产品-20 ℃条件下可以存储6个月;2-8 ℃可以存储1周。组分ABC均不能反复冻融,融化后不建议再次冻存。

2. 反应体系的确认?

该试剂盒建议反应体系10 μl。若必须使用其他反应体系,需自行验证后在进行大量样本的检测。

3. 反应条件是否可以改动?

本试剂盒的反应条件根据多种参数确定,并适用于10 μl反应体系,为确保实验数据的准确性,不建议改动。

4. 机器设备的适用与选择?

该试剂盒适用于多种实时荧光定量PCR仪,但注意Lo-ROX的添加有所不同,需严格按照试剂盒和机器说明书进行。

5. 出现无扩增?

该实验为精细实验,对操作要求较高。请按照说明书操作,尤其是加样、加样后的离心等。为提高实验成功率,可选择加倍反应体系,例如使用20 μl体系进行初步学习,实验条件可不变。

6. 如何避免未扩增的样本出现假分型结果?

不同引物的扩增背景荧光强度不同,分析结果需要判断是背景还是扩增产物荧光。因样本质量或加样失败均会导致扩增失败,此时背景荧光容易被误判为扩增信号,导致判读基因型错误。为避免此情况发生,在数据判读前,应先辨别所有样本及阴阳性对照(若有)扩增曲线是否正常;若出现无扩增或扩增曲线异常的样本,应先剔除,然后分析其他样本的基因分型结果,此样本查明情况后重新检测。

7. 扩增曲线荧光信号弱,或扩增曲线呈锯齿状?

此问题可能有多种原因造成,常见原因及解决办法见下表。

原因

解决办法

检测光谱设定误差

不同荧光定量PCR仪的检测光谱范围有差异,根据所用仪器型号设置检测的荧光信号范围。

荧光采集时间太短

扩增曲线锯齿状较明显时,将延伸时间设定为45 - 60 秒可得到改善。

目标DNA的拷贝数过少

目标DNA拷贝数只有几倍到几十倍时,容易形成线性混乱,提高样品浓度再进行反应。

样本浓度过低或严重降解

更换高浓度样本或质量更好样本进行实验。

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