产品简介：

本产品基于碘化丙啶（Propidium, PI）染色方法分析细胞周期和凋亡。碘化丙啶是一种双链DNA染料，其嵌入双链DNA中可以产生荧光，荧光的强度和双链DNA的量成正比。

在正常细胞周期中，G0和G1期有1套染色体，G2和M期细胞有2套染色体，S期介于两者之间。经PI染色后，处在不同细胞周期中的细胞的荧光强度不同。假定G0和G1期的细胞荧光强度为1，那么G2和M期的细胞的荧光强度为2，S期的细胞介于1和2之间。

细胞凋亡时，由于细胞核皱缩和DNA片段化，染色时DNA片段会从打孔的细胞膜处丢失，流式细胞仪检测时，荧光强度小于1，即Sub-G1峰或者凋亡细胞峰。

细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。凋亡前期，染色质皱缩，细胞密度增加，前向角光散色显著降低。凋亡后期，细胞产生凋亡小体，前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。

本产品可用于培养的贴壁细胞或者悬浮细胞检测，也可用于组织细胞检测。

自备耗材和设备：

1 ml 移液器

100-200 μl 移液器

旋窝混匀仪

流式细胞仪

PBS

75%乙醇

适用实验与操作过程：

1. 细胞准备-

贴壁细胞：弃细胞培养液，胰酶消化，制备单细胞悬液，1000 g离心5分钟，弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟，弃上清。

悬浮细胞：收集细胞悬液，1000 g离心5分钟，弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟，弃上清。

组织细胞：将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后，用0.25%的胰酶消化0.5-1个小时。经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000 g离心5分钟，弃上清，沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟，弃上清。

注意，最后一次离心，弃上清后留50 μl上清，涡旋混匀。

2. 细胞固定

细胞沉淀用1 ml -20 ℃预冷的75%乙醇轻轻混匀，4℃固定2小时以上或者过夜。然后，1000 g离心5分钟，轻轻弃上清，沉淀用1 ml预冷的PBS重悬，1000 g离心5分钟，弃上清。

3. 染色

PI染色工作液配置：0.5 ml染色缓冲液（C液）中加入10 μl PI染液（A液）和10 μl RNase A（B液），混匀待用。每个细胞样品加入0.5 ml配置好的PI染色工作液，轻轻混匀重悬细胞。37℃，避光孵育30分钟，直接上流式细胞仪检测（5小时内完成为佳）。激发波长为488 nm，检测红色荧光。

注意：每个检测细胞数不超过1×10⁶个。