技术简介

       细胞中有一类基因是维持存活必不可少的，称为必需基因。直接敲除必需基因会导致细胞死亡，因而无法获得目的基因敲除的细胞。条件性敲除为研究这一类基因的功能提供了帮助。

       条件性基因敲除主要通过染色体位点特异性重组酶系统实现，如Cre-loxp，Flp-FRT,Dre-Rox等，其中最常用的是Cre-loxp系统。在待敲除目的基因序列两端各插入一个loxp序列，得到Floxed（flanked  by  loxp）细胞。在细胞未表达CRE重组酶时，该基因是正常表达的。当细胞中转入Cre重组酶后，两个loxp位点之间的序列会发生重组删除，从而实现目的基因的敲除，研究人员可以在基因敲除到细胞死亡这段时间内进行观察和研究。

 

 

 

应用范围

 

 

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适用于致死基因的研究，如当基因敲除导致细胞无法增值，存活等	选择合适的启动子调控Cre重组酶的表达，可以实现特定条件下目的基因的敲除

 

 

方案选择

 

 

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拥有多种荧光筛选标记，结合流式分选，可提高获得阳性目的细胞的概率	在细胞不产生耐药的情况下，可提供多种药筛标签，满足不同实验需求。

 

 

应用案例

   细胞名称：C3H10T1/2

  基因名称：Ndufa13

   项目方案：构建Cas9/sgRNA和Donor质粒，转染目的细胞，通过流式分选GFP和mCherry阳性细胞，挑选单克隆，经鉴定后进行扩增，得到Ndufa13基因条件性敲除的单克隆细胞株。

 

 

阳性细胞鉴定：通过对流式分选筛选出的单克隆细胞进行PCR及测序鉴定，Ndufa13基因第3外显子两侧的内含子中各插入一个loxp，获得Ndufa13条件性敲除的单克隆细胞株。

 

项目流程与周期

 

交付标准

 

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按指定方案构建的目的基因编辑细胞株，每个目的细胞株交付基因型正确的2个克隆，每个克隆2支冻存细胞（1*106cells/支）	对应野生型对照细胞	项目报告及质检报告