Dispase II 分散酶II

产品信息

 

产品名称	编号	规格
分散酶II	DY50211	100mg/1g

 

产品描述

中性蛋白酶（Neutral protease），商业名称Dispase II，也称分散酶II，普遍用于不同组织和器官中的细胞分离。Dispase II是一种非特异性金属蛋白酶，能快速有效且温和的破坏组织细胞外基质释放单细胞培养物（原代细胞培养物）或收集已培养的细胞将其转移到新的培养基质上（传代培养）。另外，还能预防悬浮细胞培养过程中发生的成团现象。Dispase II极其稳定，不会受温度、pH和血清内容物的干扰；通过螯合剂或稀释很容易失活；酶活温和，对细胞损伤小，可良好维持细胞膜完整性。

本品来源于多粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa），无支原体或其他动物病毒污染。以非无菌的冻干粉形式提供，比活力≥0.8 U/mg蛋白，使用前需进行除菌。常用工作浓度范围为0.6-2.4 U/ml。 反应最佳pH: 6.0-8.5。 激活剂：最佳Ca²⁺为2mM，该酶已含足量Ca²⁺确保最佳酶活力。 抑制剂： EDTA, EGTA, Hg²⁺,以及其他重金属。该酶活性不受血清干扰。

保存方式

2-8℃干燥保存，可保存12个月。

 

操作说明

一、储存液和工作液制备

1）储存液制备：用Hepes缓冲盐溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl）溶解Dispase II冻干粉，配制成10mg/ml的储存液，用0.22µM滤膜过滤除菌。本储存液置于2-8℃，2周稳定；根据单次用量分装冻存，高达2个月稳定，避免反复冻融。

2）工作液制备：使用时用合适的细胞培养液将储存液稀释到工作液浓度即可，常用工作浓度为0.6-2.4 U/ml。不推荐使用>2.4 U/ml的工作浓度。具体使用浓度请根据自身实验体系或参考文献来调整。

 

二、组织的解离

1）用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成小块；

2）用无菌PBS清洗组织块；

3）向上述组织块中加入Dispase II溶液（工作浓度为0.6-2.4 U/mL），确保全部浸没。

4）37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。

注意：若第一次使用该酶，可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织，1h即可达到分离目的，也可以孵育更长时间。

5）如有需要，可用无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块，或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，如有必要，换用新鲜酶溶液以进一步解离残留组织。

6）离心沉淀细胞，倒掉酶溶液；

7）用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。

 

 

 

 

 

 

三、 细胞传代

1）利用Dispase 溶液（37℃预热）浸没细胞，于37℃孵育5 min；

2）吸除上述溶液，继续于37℃孵育10 min；

3）显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育15 min；

4）利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞；

5）换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。

 

 

 

 

 

本产品仅作科研用途