血清外泌体纯化试剂盒

（Magnetic Beads）

三、产品简介。

本产品是一款以Magnetic Beads为分离材料的外泌体纯化试剂盒。在特定的缓冲体系中，Magnetic Beads可吸附外泌体，并被洗脱液（PBS或ddH₂O）洗脱下来，从而完成外泌体的分离与纯化。同时，利用PBS或ddH₂O洗脱后的外泌体不含其它化合物，可直接用于细胞培养实验和动物体内注射。

四、特点与优势。

1.     本试剂纯化效率高，外泌体回收率达到95%以上。

2.     本试剂盒纯化的外泌体纯度高，杂蛋白含量在5%以内。

3.     本试剂盒操作简单，能够快速（2 h）完成外泌体纯化。

4.     本试剂盒操作温和，纯化时间短，纯化的外泌体完整性好。

5.     本试剂盒纯化的外泌体不含其它化合物，可直接用于细胞培养实验和动物体内注射实验。

五、使用说明。

1.    本产品主要用于血清、血浆及其他外泌体含量丰富的样品中的外泌体纯化。

2.    样品准备。血清等样品转入离心管，3000 g，4 ℃离心5 min，弃沉淀，上清转移至新的离心管中，用于外泌体纯化。

3.    Magnetic Beads准备。取出试剂盒中的瓶装Magnetic Beads，震荡混匀（Vortex）30 sec，利用移液器吸取0.6 mlMagnetic Beads，加入15 ml离心管中，3000 g，4 ℃离心2 min，弃上清。

4.    Magnetic Beads洗涤。加入10 ml，4 ℃预冷的PBS，震荡混匀（Vortex）30 sec，3000 g，4 ℃离心5 min，弃上清。

5.    外泌体纯化体系。外泌体纯化体系为6 ml，可以纯化4 ml左右的血清样本，各组份如下表。

                表1. 外泌体纯化体系表

6.       外泌体纯化体系配制。根据外泌体纯化体系表，配制外泌体纯化体系，若样品体积不足4.14 ml，可以用ddH₂O补齐体积。也可以按照比例减少各试剂的用量（请勿随意更改各试剂比例，易导致外泌体纯化失败），构建小体系外泌体纯化系统。

7.       孵育。外泌体纯化体系配制完成后，置于旋转混合器中，4 ℃旋转混合60 min。

8.       Magnetic Beads收集。孵育完毕将离心管转入离心机，3000 g，4 ℃离心5 min，沉淀Magnetic Beads，弃上清；或将离心管置于磁力架上，4 ℃静置5-10 min，使Magnetic Beads 聚集，弃上清。

9.       残余液体去除。将装有Magnetic Beads 沉淀的离心管转入离心机，3000 g，4 ℃离心1 min，用移液器吸尽管中残余液体。

10.   外泌体洗脱。加入0.8-1.5 ml Buffer EXE（PBS或ddH₂O），剧烈振荡（Vortex）30 sec。

11.   外泌体收集。7000 g，4 ℃离心2 min，将离心管置于磁力架上（可以有效聚集Magnetic Beads，防止Magnetic Beads散落在溶液中，降低外泌体纯度），转移上清至新的EP管中，即为纯化的外泌体溶液。

12.   过滤。利用PBS润洗针式过滤器A和B（即用这两种滤器过滤5 ml PBS），并利用针式过滤器A过滤外泌体溶液，除去体积较大杂质。滤液再用针式过滤器B过滤，除去体积较小的杂质，得到高纯度的外泌体溶液。

13.   纯化的外泌体溶液可立即用于粒径检测（NTA分析），或保存在-80 ℃。