小鼠原代肝细胞 （贴壁）
- LV-PMH001
- 立沃
- 广东省深圳市
- 一周内
- 4-8million
- 3500 元
- 2022-05-31 18:17:29
立沃生物科技（深圳）有限公司
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- 关键词
- 原代肝细胞肝细胞小鼠
I 简介
立沃生物科技是一家专注于原代肝细胞分离、冻存
与再生的国家高新技术企业。小鼠原代肝细胞分离自
SPF 级小鼠，细胞纯度高（
>95%），经过多种测试，复
苏后细胞活力高、极化（分化）形态明显，可广泛应用
于基础生命科学研究以及药物研发中。
II 试剂与材料
-小鼠原代肝细胞（Cat# LV-PMH001）
-复苏培养基（Cat#LV-Rec001）
-纯化培养基（如需要，随细胞赠送）
-铺板培养基（贴壁肝细胞需要，Cat#LV-WEP006）
-维持培养基（贴壁肝细胞需要，Cat#LV-WEM006）
-胶原包被板（贴壁肝细胞需要，Cat#LV-Coated）
-无菌 15ml 离心管
-一次性移液管
-宽口移液枪头（普通移液枪头剪去尖头，再灭菌）
-移液枪
-恒温水浴锅（
37℃预热，请用温度计校准）
-冷冻水平离心机（带水平转子，可离 15ml 离心管）
-生物安全柜
-37℃/5% CO2培养箱
-75% 酒精
III 悬浮细胞的复苏
1. 生物安全柜中，将 10ml 复苏培养基加入到 15ml 离
心管中，37℃恒温水浴锅预热 20min，然后转移到
生物安全柜中；铺板培养基 37℃预热。
2. 将冻存的肝细胞从冷藏位置迅速转移至 37℃恒温
水浴锅中，尽可能多的浸入 37℃水中，顺时针水平
摇动，但必须确保冻存管管盖保持在水面以上。
3. 解冻冻存管约 90 ~120s，至冻存管中只有小块碎冰
漂浮即可。
4. 用 75%酒精消毒冻存管，并将其转移到生物安全柜。
5. 用宽口枪头将细胞吸出，并以滴加方式转移至含已
预热的复苏培养基的离心管中（注意：冻存管与枪
头上残留细胞，可吸取 1ml 复苏培养基清洗冻存管
与枪头并将其混入离心管的培养基中），轻微上下
颠倒离心管 2-3 次混匀。
6. 用台盼蓝排除法测定肝细胞的活力、活细胞数。按
照实验要求加入药物，测定药物代谢情况。
7. 如细胞密度达不到要求或者担心冻存液对代谢酶
活性有影响，可直接低速离心（离心对细胞活力有
一定的影响），50×g，常温离心 5min。去上清，
用药物代谢专用培养基（客户自备）重悬，用台盼
蓝排除法测定肝细胞的活力、活细胞数。按照实验
要求加入药物，测定药物代谢情况。
IV 贴壁细胞的复苏与铺板
1. 生物安全柜中，将 10ml 复苏培养基加入到 15ml 离
心管中，37℃恒温水浴锅预热 20min，然后转移到
生物安全柜中；纯化培养基常温放置（如需要）；
铺板培养基 37℃预热。
2. 将冻存的肝细胞从冷藏位置迅速转移至 37℃恒温水
浴锅中，尽可能多的浸入 37℃水中，顺时针水平摇
动，但必须确保冻存管管盖在水面以上。
3. 解冻冻存管约 90-120s，至冻存管中只有小块碎冰漂
浮即可。
4. 用 75%酒精消毒冻存管，并将其转移到生物安全柜。
5. 用宽口枪头将细胞吸出，并以滴加方式转移至含已
预热的复苏培养基的离心管中（注意：冻存管与枪
头上残留细胞，可吸取 1ml 复苏培养基清洗冻存管
与枪头并将其混入离心管的培养基中），轻微上下
颠倒离心管 2-3 次混匀。
6. 直接低速离心，50×g，常温离心 5min，去上清，用
4ml 铺板培养基重悬，用台盼蓝排除法测定肝细胞
的活力，若活力>70%，可直接铺板，反之则需进行
纯化。
7. 细胞纯化：将细胞悬液离心，50×g，常温离心 5min，
去上清，用 2ml 纯化培养基（免费提供）重悬细胞，产品说明书
然后沿管壁向离心管小心加入 1ml 铺板培养基（切
勿扰动下层，加入后可见明显分层）；800×g，4℃
离心 20min（升速为 9，降速为 1），离心后，吸取
纯化培养基和铺板培养基之间的浑浊带（活细胞层），
转移到新的 15mL 离心管中，加入 2 倍体积的铺板
培养基，混匀后，50×g，常温离心 5min，去上清，
用 4ml 铺板培养基重悬细胞。
8. 用台盼蓝排除法测定肝细胞的活力和细胞总量，建
议检测 3 次，求取平均值。
9. 按活细胞数 1×105cells/ cm2 接种到胶原包被培养板
中，摇匀，置 37℃/5%CO2 培养箱中培养。推荐步
骤：接种后 2-4 小时，可对细胞轻轻换液（此时细
胞处于半贴壁状态），加入预热的新鲜铺板培养基，
以提升细胞状态。
V 肝细胞维持培养
1. 培养过夜（接种后 8-16 小时），细胞已经完全贴壁，
移除铺板培养基，加入维持培养基，每 2 天换液 1
次。
2. 小鼠原代肝细胞具有有限的增殖能力，具有明显的
接触抑制特性，且肝细胞的分化特性及其培养时间
依赖于高密度的细胞培养。
3. 小鼠原代肝细胞体外维持时间相对较短，建议实验
在铺板后 2 天内完成，最长不超过 4 天，不建议对
小鼠肝细胞进行传代培养。
