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mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase
  • M072
  • 近岸蛋白
  • 上海市
  • 现货
  • 2500U
  • 询价
  • 2023-02-03 09:46:49

苏州近岸蛋白质科技股份有限公司

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产品用途

提高RNA的翻译效率;
改善mRNA在显微注射和转染后的表达。

保存条件

-20℃保存,收到后请立即分装以避免反复冻融。

活性定义

1 单位是指在37℃ 的条件下,1小时内将10 pmol 80 nt 的带帽RNA转录子甲基化所需酶量。

质量控制

无大肠杆菌DNA残留、无核酸内、外切酶残留及RNA酶残留。

注意事项

SAM:需事先计算好SAM的用量,在反应开始前把分装的32 mM的储备液稀释成2 mM的工作液。SAM在pH 7-8,37°C条件下不稳定,需要在反应开始之前新鲜配置。为避免SAM降解,该工作液需要保存于冰上。
Cap 0-RNA的制备:IVT RNA需进行纯化并溶解于RNase-free水中,不能将RNA溶解在EDTA溶液或其他盐溶液中。Cap 0-RNA可通过近岸蛋白质Vaccinia Capping System(货号:M062)反应体系获得。为减少反应步骤,也可通过在同一体系内添加两种酶直接获得Cap1-RNA,该反应基于近岸蛋白质Cap 1 Capping System(货号:M082),试剂盒内涵盖Vaccinia Capping System和mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase。
RNA二级结构:一些RNA转录本可能形成稳定的二级结构(同源二聚体和发卡结构),如二级结构发生在转录本的5'端会影响加帽效率。在与加帽酶反应之前加热RNA可以去除转录产物5´端的二级结构,如果转录产物的5´端结构复杂,可以把加热时间延长至10min。
Poly(A) 尾:如果加帽的RNA需要添加3'-poly(A)尾巴,可以使用近岸蛋白质E. coli Poly(A) Polymerase(货号:M012)进行加尾。加帽和加尾后的RNA需在进行RNA转染实验前做纯化处理。
RNase Inhibitor:在配置反应体系时,可以加入0.5 µl近岸蛋白质RNase 抑制剂(货号:E125),同时去掉等体积的RNase-free水。

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