非洲猪瘟病毒LAMP检测试剂盒（森康）
- 036021MSK
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- 2022-07-25 11:28:17
广州双螺旋基因技术有限公司
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（1）反应预混液的配制 按照下表配制反应预混液（注：配制和分装反应预混
液时应在冰盒上进行）。按照 n+2 管配制（n = 样品数）。
表 2 反应预混液的配制
序号
组份
1 头份样品的量（
μL）
（n+2）头份样品的量（
μL）
1
荧光等温扩增
免提取反应液
22
22×（n+2）
2
Bst DNA 聚合酶
1.0
1.0 ×（n+2）
（
2）反应预混液分装 取 n+2 个 0.2mL PCR 管，将配制的反应预混液涡旋混匀，
瞬时离心后，按每管 23μL 分装于 PCR 管内。
（
3）每管加入 20 μL 矿物油。
（
4）加样 向对应的 PCR 管底部加入上述处理的样品 2.0 μL。同时，向阳性对
照管内加入 2.0 μL 阳性对照，向阴性对照管内加入 2.0 μL 阴性对照。盖紧管盖，瞬时
离心，转移至检测区。
（
5）检测 将离心后的 PCR 管放入检测仪内（专用配套仪器或普通的荧光 PCR
仪均可），设定好被检样品（S）、阳性对照（PC）、阴性对照（NC）的位置。反应参
数设置：采用 64℃ 60min，每 1min 采集一次 FAM 通道荧光信号，共采集 60 次。
※读取结果后，切记不要打开反应管，避免造成环境污染。
2 判定
2.1 结果分析条件的设定
阈值设定原则：根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过阴性对照品扩增
曲线的最高点为准。
2.2 质控标准
2.2.1 阴性对照无 Tt 值（Time Threshold）并且无扩增曲线即 S 型扩增曲线。
2.2.2 阳性对照的 Tt 值应小于或等于 45，并出现典型的扩增曲线。
2.2.3 如阴性和阳性对照不满足以上条件，此次实验视为无效。
2.3 结果判定
2.3.1 阴性：无 Tt 值，且无特征性扩增曲线，表明样品为阴性。
2.3.2 阳性：Tt 值≤45，且出现典型的扩增曲线，表示样品为阳性。
2.3.3 Tt 值＞45，且出现典型的扩增曲线的样品建议复验，复验仍出现上述结果
的，判为阳性，否则判为阴性。
2.3.4 出现 Tt 值但无特征性扩增曲线的样品，判定为阴性。
【注意事项】
1 血液采集须用肝素钠抗凝，若用 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，须用双蒸水作
1:100 稀释。
2 实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，请严格按照操作步骤进行检测。反应液在
使用前要彻底融化。分装反应液时，应尽量避免产生气泡。上机前注意检查各反应管
是否盖紧，以免交叉污染。阳性对照在吸取前应瞬时离心后使用。
3 本试剂盒需-20 ℃保存，并在有效期内使用。试剂盒中各组分应避免反复冻融。
4 鉴于 ASFV 为一类检疫性疫病，上述操作应在相关生物安全设施内进行。对样
品及其废弃物的操作应严格遵守生物安全规定。
5 扩增完的 PCR 小管切勿打开，以防污染。
6 本试剂盒仅供兽医诊断使用。
【贮藏与有效期】 -20℃保存，有效期为 12 个月。
【规格】 48 检测/盒
【批准文号】
【生产企业】 北京森康生物技术开发有限公司
