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大肠杆菌蛋白表达

货号 JKR0011
品牌 金开瑞
发货地 湖北省武汉市
交期 现货
规格 
参考价格 请详询！ 
更新时间 2022-06-10 14:57:37

武汉金开瑞生物工程有限公司

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别名
大肠杆菌蛋白表达

关键词
大肠杆菌蛋白表达

大肠杆菌表达系统是目前最常用，也是最经济实惠的蛋白表达系统，与其他表达系统相比具有遗传背景清楚，目的基因表达水平高，培养周期短，抗污染能力强等特点，是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具。
金开瑞的大肠杆菌表达平台可提供全方位的重组蛋白生产服务，在表达包括可溶性蛋白、包涵体、融合蛋白等方面，拥有丰富的经验和专业技术，能解决蛋白表达过程中的各种瓶颈问题。到目前为止，已为全球各地客户提供超过3000种蛋白。

服务优势
1、His、GST、MBP等标签多种表达方式同时进行，确保获得zui优质的蛋白；
2、保证蛋白为普通缓冲可溶；
3、纯化的蛋白经过ELISA，Western-blot，或者其它生物活性验证；
4、可提供详细的表达纯化条件，实验数据以及菌株。

客户提供
目的蛋白信息或基因序列，质粒（也可以选择由金开瑞提供）；
蛋白询价信息表（请点击下载中心，下载蛋白询价信息表后详细填写）。

最终交付
蛋白纯品，纯度90%以上；
蛋白表达结题报告，包括测序报告、实验条件、蛋白表达纯化检测结果。

服务内容

服务名称	服务项目	服务内容	交付结果	服务周期
普通型大肠杆菌重组蛋白表达服务	质粒构建	采用GST、Trx、SUMO、BMP、His、HA、Flag、myc等多种标签载体进行重组载体构建，可采用PTG、阿拉伯糖、热休克、冷休克等多种诱导方式。	表达质粒测序报告	1周
	表达菌株筛选	转化表达质粒于高效表达E.coli菌株，SDS-PAGE电泳检测挑选合适的单克隆菌株用于目的蛋白表达。BL21 (DE3)、BL21 (DE3) pLys、 Golden、Rosetta(DE3)、 RosettaBlue(DE3)、Rosetta gami B (DE3)、C41、Arctic express等多种宿主菌株供选择。	表达菌株 SDS-PAGE图谱	3个工作日
	目标蛋白表达及纯化、标签切除	摇瓶培养2-8 L重组阳性克隆诱导目的蛋白表达。通过亲和层析、离子交换、疏水及凝胶过滤等多种技术纯化目的蛋白，也可根据需求切除标签，再纯化获得目的蛋白。	大于1mg目的蛋白，纯度最少90%以上	2-3周
	包涵体复性	数百种缓冲液及复性条件快速筛选得到最佳复性缓冲液及复性条件。可采用稀释复性、透析复性、柱层析复性等多种技术获得纯度大于90%的包涵体蛋白。	大于1mg目的蛋白	2-3周
上清保证型大肠杆菌重组蛋白表达服务	质粒构建	采用pCold-SUMO载体，SUMO标签促溶的同时采用低温诱导方式，促进蛋白的可溶性表达。	表达质粒测序报告	1周
	表达菌株筛选	转化表达质粒于Arctic express表达菌株，宿主在表达分子伴侣Cpn60和共分子伴侣Cpn10的同时低温诱导提高上清蛋白的表达量，SDS-PAGE电泳检测挑选合适的单克隆菌株用于目的蛋白表达。	表达菌株 SDS-PAGE图谱	3个工作日
	目标蛋白表达及纯化、标签切除	摇瓶培养2-8 L重组阳性克隆诱导目的蛋白表达。通过亲和层析、离子交换、疏水及凝胶过滤等多种技术纯化目的蛋白，也可根据需求切除标签，再纯化获得目的蛋白。	大于1mg目的蛋白，纯度最少90%以上	3-4周

案例展示
1、GFP原核表达优化：
GFP蛋白原核表达通常以包涵体形式表达，普通光源下，极难观察到绿色荧光。我公司通过对GFP序列进行突变，并对启动子进行筛选，优化培养条件，控制表达速率，用大肠杆菌表达的GFP蛋白，完全以可溶形式表达，自然光下可见强烈的绿色荧光。

2、复性条件筛选：
采用96孔板阵列组合pH、盐浓度、氧化还原对、分子伴侣、表面活性剂等因素。将变性蛋白加入微孔板进行快速稀释复性，快速初筛几百种复性条件。

下图为GFP包涵体采用上述方法进行复性筛选

3、上清保证型蛋白表达：
客户经过尝试在大肠杆菌DE3中表达目的蛋白A，未能获得上清蛋白，金开瑞采用Arctic Express表达体系，采用低温诱导和分子伴侣共表达方式，历经40个工作日，获得了在上清中表达的目的蛋白，得到客户的认可。

客户经过尝试在大肠杆菌DE3中表达目的蛋白B，目的蛋白表达为包涵体，但是客户需要上清表达的蛋白进行后续实验，后经过金开瑞的Arctic Express表达体系，历经35个工作日，获得了在上清中表达的目的蛋白。