产品说明：

NFKB-RE-Luci（Rluci）细胞株（A549）表达NFkappaB反应元件控制的萤火虫荧光素酶和作为内参的海肾荧光素酶。细胞采用人肺癌细胞A549构建，采用hygromycin抗生素筛选得到的稳定细胞株。该细胞株可以通过Luciferase反应NFKB信号通路的活性。

产品资料：

品名：NFKB-RE-Luci（Rluci）细胞株（549）
货号：CS026
原始细胞株：A549
构建方法：转座子
抗性：hygromycin
克隆属性：多克隆细胞株
培养基：MEM+10%FBS，hygromycin 50ug/ml

产品包装：

1×10^6 细胞/支，1支。干冰运输。

产品验收注意  事项：

细胞形态：

培养基：MEM培养基+10%FBS，hygromycin 1ug/ml。可根据培养习惯加入双抗。
漂洗液：PBS
消化液：0.25%胰蛋白酶+0.5mM EDTA，溶解于PBS
冻存液：MEM培养基+40%FBS+10%DMSO

初始培养（细胞复苏及培养）：

收到细胞请立即复苏。初步检查无污染、细胞存活后请扩大培养，冻存足量细胞以备以后实验使用。

1) 准备37℃恒温水浴，细胞培养基，60mm细胞培养皿或者25cm培养瓶。

2) 将细胞冻存管放入37℃水浴中快速融化，期间不断晃动冻存管加速溶解。

3) 3000g 室温离心5min。

4) 用70%乙醇清洁冻存管外壁。在超净工作台中弃去上清液。

5) 用1ml培养基轻轻吹吸重悬细胞沉淀。接种到已准备细胞培养皿，补足培养5ml。

6) 37℃，5% CO2培养24h，观察细胞贴壁情况。

7) 48h后根据细胞密度换液或传代。

8) 以后每2-3天传代一次。当细胞达到5×10^6个（约1个10cm培养皿的量），准备冻存部分细胞。剩余细胞用于实验。

细胞冻存：

1) 消化生长良好的细胞，用细胞培养基重悬，细胞密度为1×10^6 /ml左右。

2) 加入等体积的2×冻存液（80%FBS+20%DMSO）。轻轻吹吸混匀。

3) 分装到冻存管中，放入程序降温盒过夜。

4) 将细胞转移到液氮罐中。

试剂：                   

TNFa（sigma，H8916），双荧光素酶检测试剂盒（碧云天，RG088S）

细胞刺激：

1) 消化收集生长良好的细胞，均匀铺至96孔板，培养24小时。

2) 用细胞培养基稀释TNFa至0.4ug/ml，再进行2倍比稀释，共计15个浓度梯度。用稀释好的含TNFa培养基替换原培养基，继续培养12小时。每个刺激浓度3个重复孔。对照组用不含TNFa的培养基换液。

3) 刺激完成后去除培养基，每孔加入15ul裂解液，然后进行检测。

实验结果

试剂：

TNFa（sigma，H8916），双荧光素酶检测试剂盒（碧云天，RG088S），地塞米松（sigma，D1756）

细胞刺激：

实验结果：