LabFect SP悬浮细胞小核酸转染试剂

 

货号：T1024

存储条件：蓝冰运输，4°C 保存，超一个月不用于-20°C储存，-20℃保存条件下，有效期为 1 年。避免反复冻融。

 

产品特点：

卓越的悬浮细胞转染性能：细胞转染阳性率一般在75%以上，基因敲除效率在80%以上；

极低的细胞毒性：转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；

转染细胞范围广，绝大多数悬浮细胞都能获得比较理想的转染结果。

 

产品介绍

LabFect 可用来转染 siRNA、miRNA mimics、miRNA inhibitor 等 200bp 以内的小分子 RNA，可转染绝大多数悬浮细胞。目前， 无论国外还是国内，悬浮细胞的核酸转染都是个热点难题，市场还缺乏真正有效的商品化的悬浮细胞小核酸转染试剂。LabFect 能够高效转染绝大多数悬浮细胞，获得比较理想的基因敲除效果。对于大多数悬浮细胞，LabFect 的细胞转染阳性率都在 75%以上，而转染细胞死亡率不到10%。LabFect 的使用也极其简便，先将 sRNA 与 LabFect 室温混合，再将siRNA-LabFect 混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。

 

应用：

siRNA 转染

antisense RNA 转染

200bp 内的小分子 DNA 转染

 

质量控制

本产品经严格的质量检验证明，无生物污染。

 

操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。  

1. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔500 μl培养基，使细胞在转染时密度在30-50%，尽量不要使用抗生素。

2.  siRNA-Labfect SP混合物准备：

2.1  6pmol siRNA 用 50μl 无血清培养基稀释。

2.2  2μl Labfect SP用 50μl 无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育 5min。

注意：确保在 25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。   

2.3 孵育 5min 后，将 siRNA 稀释液与 Labfect SP稀释液混合（总体积 100μl）。轻轻混匀，室温孵育 20 min。

3.  将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）：

3.1  将100μl混合物加入培养孔内，培养孔内含有 0.5ml 培养的细胞。轻轻晃动培养板 5min，混匀。

3.2  37°C培养48-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、 所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。

 

 

注意事项:

1. 悬浮细胞转染难度较大，首次转染时，请务必对转染条件进行优化。例如：24 孔培养板，可进行如下交叉实验：

LabFect	siRNA(pmol)
2ul	20、30、40、50
3ul	20、30、40、50
4ul	20、30、40、50

 

2. 转染时，细胞生长状态应保持良好，密度不能过大，培养液尽量不要使用抗生素，否则会导致细胞死亡增加。

3. 为了提高转染效率，转染后培养板可放于微型振荡器上培养或每隔 1 小时人工晃动 1 次。

 

LabFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels

 

Surface area/well		Vol. of growth medium	Vol. of dilution medium	siRNA Amount	LabFect
	(cm2)	(µl)	(µl)	(pmol)	(µl)
96-well	0.3	100	2 x 10	6	0.6
48-well	0.8	250	2 x 25	15	1.5
24-well	2	500	2 x 50	30	3
12-well	4	1000	2 x 100	60	6
6-well	10	2500	2 x 250	150	15