Hieff Trans® PEI转染试剂
- 40820ES04
- 翌圣
- 上海市
- 现货
- 1.5 mL
- 10 mL
- 100 mL
- 3085.00 元
- 2023-04-10 15:21:06
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品描述
Hieff Trans® PEI转染试剂是一种经过优化改造后的线性化聚乙烯亚胺（Polyethylenimine Linear, PEI），浓度为1 mg/mL。本产品纯化学合成，不含动物源成分，特别适合多质粒的共同转染，用于重组病毒载体的生产，以及重组蛋白的瞬时表达生产。本产品细胞毒性低、转染效率高、兼容抗生素，在HEK293等细胞中基因表达效率较高。
运输与保存方法
运输方式：冰袋运输。
保存方式：2-8ºC保存，有效期2年。
保存方式：2-8ºC保存，有效期2年。
注意事项
1）为提高转染效率，建议悬浮细胞在无血清培养体系中驯化几天后进行转染操作。
2）转染过程中推荐使用高质量的质粒，如不含内毒素的质粒。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。
4）本产品仅用于科研用途。
转染操作流程
一 悬浮细胞（以1 L体系为例）
1 接种细胞
根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议细胞接种密度为1-1.5×106 cells/mL，使第二天转染时细胞密度为2-3×106 cells/mL为宜。
2 转染复合物配置
1）质粒与试剂比例：建议质粒（μg）与试剂（μL）参考配比区间为1:1 - 1:3。
2）质粒稀释：使用50 mL无血清培养基（Opti-MEM）稀释2 mg质粒，并轻轻混匀。
3）试剂稀释：使用48 mL无血清培养基（Opti-MEM）稀释2 mL Hieff Trans® PEI转染试剂，并轻轻混匀。
4）配置复合物：将配置好的50 mL试剂稀释液加入到50 mL质粒稀释液中，轻轻涡旋混匀后，室温静置10-20 min，形成质粒-PEI复合物，备用。
3 转染细胞
1）直接将100 mL的质粒-PEI复合物加入1 L培养的细胞中。
2）在合适温度与CO2等条件下继续培养细胞，并在培养72 h-96 h或摸索的合适条件下进行病毒收获。
图1 Hieff Trans® PEI转染试剂操作步骤示意图
二 贴壁细胞（以10 cm培养皿为例）
1 接种细胞
根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议细胞铺板密度为50-80 %，使第二天转染时细胞密度70-90 %为宜。
2 转染复合物配置
1）质粒与试剂比例：建议质粒（μg）与试剂（μL）参考配比区间为1:1至1:3。
2）质粒稀释：使用250 μL无血清培养基（Opti-MEM）稀释8 μg质粒，并轻轻混匀。
3）试剂稀释：使用242 μL无血清培养基（Opti-MEM）稀释8 μL Hieff Trans® PEI转染试剂，并轻轻混匀。
4）配置复合物：将配置好的250 μL试剂稀释液加入到250 μL质粒稀释液中，轻轻涡旋混匀后，室温静置10-20 min，形成质粒-PEI复合物，备用。
3 转染细胞
1）直接将500 μL的质粒-PEI复合物加入10 mL培养的细胞中。
2）在合适温度与CO2等条件下继续培养细胞，并在培养72 h-96 h或摸索的合适条件下进行病毒收获。
表1 不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）
|
培养容器
|
表面积（cm2）
|
DNA稀释
|
转染试剂稀释
|
培养基
总量
|
||
|
DNA量（μg）
|
稀释液体积（μL）
|
转染试剂量（μL）
|
稀释液体积（μL）
|
|||
|
96孔板
|
0.3
|
0.1
|
5
|
0.1
|
5
|
100 μL
|
|
48孔板
|
0.7
|
0.2
|
10
|
0.2
|
10
|
200 μL
|
|
24孔板
|
1.9
|
0.5
|
25
|
0.5
|
25
|
500 μL
|
|
12孔板
|
3.8
|
1
|
25
|
1
|
25
|
1 mL
|
|
6孔板
|
10
|
2
|
50
|
2
|
50
|
2 mL
|
|
25 cm2培养瓶
|
21
|
4
|
100
|
4
|
100
|
4 mL
|
|
75 cm2培养瓶
|
58
|
8
|
250
|
8
|
250
|
10 mL
|
|
10 cm培养皿
|
60
|
8
|
250
|
8
|
250
|
10 mL
|
