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菲罗门多糖型手性色谱柱的使用及维护

发布时间:2022-09-06 08:25:20 I 企业名称:广州菲罗门科学仪器有限公司 I 作者:FLM

菲罗门手性色谱柱用户必备

菲罗门 Chiral 多糖型手性柱的使用及维护

一、手性固定相一览表

 

正相涂敷型固定相

Chiral ND,ND(2), NQ(2),NS(2),NT(2),NX(2), NY(2),NZ(2), MB(2), MC(2), MF(2), MG(2), MD,MD(2),MJ(2),MQ(2),MX(2), MZ(2)

正相键合型固定相

Chiral INA, INB, INC, INJ

反相涂敷型固定相

Chiral ND(2)-RH, NQ(2)-RH, NS(2)-RH,NX(2)-RH, NY(2)-RH,NZ(2)-RH,MD(2)-RH, MJ(2)-RH,MQ(2)-RH,MX(2)-RH, MZ(2)-RH

 

常用优化峰形的添加剂的选择(正相,反相,SFC 都可使用)

 

 

酸性样品

碱性样品

常规一般使用

三氟乙酸,甲酸

(0.1%-0.5%)

二乙胺

(0.1%-0.5%)

考虑继续调整峰形使用

甲磺酸

(0.1%)

三乙胺、乙醇胺、正丁胺

(0.1%-0.5%)

特别需要时,酸性与碱性添加剂可以同时添加,建议各 0.1%

添加剂适合正相以及 SFC 超临界流体,以及反相(反相应用时,建议 0.05%-0.1%

 

三、正相涂敷型手性固定相常用起始条件

 

 

2

起始条件

HEX:IPA=80:20

HEX:EtOH=80:20

调整范围

HEX 99% 50%之间

HEX 99% 50%之间

HEX:正己烷,IPA:异丙醇,EtOH:无水乙醇

HEX 比例增加,保留时间会变长

IPA EtOH 一般比例不超过 50%,遇到极性特别大的样品,允许最高至 95%,正常

情况控制在 50%以下

起始柱温为 25℃,起始流速建议在 0.8ml/min 左右。有条件的情况下,温度在 5-25℃ 内调整,对分离度可能产生大的影响。温度低有时利于拆分,温度高,出峰快,峰形

可能更尖锐

Chiral MF(2), Chiral MG(2)流动相中不能用乙醇

正相涂敷型手性固定相不能接触下列溶剂:甲基叔丁基醚(MtBE),二氯甲烷(DCM)

四氢呋喃(THF),乙酸乙酯(EtOAc),氯仿(CHCl3),丙酮等

 

 

 

起始条件

HEX:IPA=80:20

HEX:EtOH=80:20

调整范围

HEX 99% 50%之间

HEX 99% 50%之间

 

3

4

起始条件

MtBE:EtOH=98:2

HEX:DCM=50:50

调整范围

MtBE 98% 60%之间

HEX 85% 50%之间

 

5

6

起始条件

HEX:THF=70:30

HEX:EtOAc=50:50

调整范围

HEX 99% 70%之间

HEX 99% 50%之间

 

7

8

起始条件

HEX:CHCl3=30:70

ACN:IPA( MeOH)100:0

调整范围

HEX 60% 100%之间

ACN 100% 90%之间

HEX 比例增加,保留时间会变长

除了上述溶剂,溶解与洗脱的必要性下,丙酮以及 1,4 二氧六环也可使用

起始柱温为 25℃,起始流速建议在 0.8ml/min 左右。有条件的情况下,温度在 5-25℃ 内调整,对分离度可能产生大的影响。温度低有时利于拆分,温度高,出峰快,峰形

可能更尖锐

 

五、反相手性固定相常用起始条件

 

 

酸性及两性化合物

碱性化合物

中性化合物

 

 

 

水相 40%

0.1%甲酸水

0.1% TFA

 

 

 

0.1% TFA

PH=2 100mM

氯酸钠水溶液

PH=2.5 50mM 磷酸

缓冲盐

PH=2.5 100mM

氟磷酸钾水溶液

0.1%磷酸水

20mM 碳酸氢铵水

溶液(PH=9

PH=2 100mM

酸钠水溶液

20mM 碳酸氢铵水溶液(PH=9),含0.1% DEA

PH=2 100mM

磷酸钾水溶液

有机相 60%

ACN, MeOH, IPA

 

 

常规清洗

HEX:IPA=80:20 0.4ml/min 1-2 小时并直接保存

柱效下降,峰形不正常时可能的特殊残留物清洗,再生

酸性残留

碱性残留物

性质不确定的残留物

EtOH(0.1% DEA)

0.2ml/min 2

EtOH(0.1% TFA)

0.2ml/min 2

1 EtOH(0.1% TFA)

0.2ml/min 2

 

 

2 EtOH(0.1% DEA)

0.2ml/min 2

清洗完毕后,再用 HEX:IPA=80:20 0.4ml/min 1 小时,并按 COA 测试后直接保存

EtOH 不适用于 Chiral MF(2) Chiral MG(2)固定相。Chiral INB, INC 可用 EtOAc 再生

说明:如果是柱头堵塞与污染,可以 0.2ml/min 流速倒冲

 

七、反相涂敷型与键合型手性柱的清洗与保存

 

常规清洗

ACN:H2O=10:90 0.5ml/min 1 小时,ACN:H2O=90:10 0.5ml/min 1 小时,保存于

ACN:H2O=75:25(或 60:40)体系中

柱效,柱压,峰形问题时,特殊残留物的清洗,再生

第1步:MeOH:H2O=10:90( 0.1% TFA ) 0.2ml/min 1 小时

第2步:MeOH:H2O=90:10( 0.1% TFA ) 0.2ml/min 1 小时

第3步:MeOH:H2O=99:1( 0.1% TFA ) 0.2ml/min 2 小时

4 步:ACN:H2O=75:25 0.5ml/min 30 分钟,并按 COA 测试后直接保存

说明:如果是柱头堵塞与污染,可以 0.2ml/min 流速倒冲

 

八、手性色谱柱启用与切换的注意

 

所有正,反相手性柱启用时,建议流动相下 0.2ml/min 流速先运行 10 分钟,再提升到

0.5ml/min 流速运行 5 分钟,再提升到需要运行的流速

正相涂敷型与键合型手性柱,都可以在正相体系,SFC 体系(甲醇与液态二氧化碳体系) 以及 PO 极性体系 ACN 或纯 MeOH 为流动相,或者含 5% IPA切换使用。从一种体系切换到另一种体系时,需用 20 倍柱体积的 IPA 0.2ml/min 冲洗以切换。按

250*4.6mm 柱计算,20 倍柱体积约 50ml

键合型手性柱,出厂在正相体系中,如果要转化为反相柱使用,需用 20 倍柱体积的

IPA  0.2ml/min 冲洗后,再用反相体系冲洗转化为反相柱,之后按反相柱的操作进

行。一旦转化为反相手性柱,则不能再切换回正相

 

 

适用 PH 范围为 2-

适用温度范围为 0-40

适用压力上限为 300bar

可供应色谱柱,制备柱产品的粒径为 3u, 5u, 10u,内径为 2.1mm, 3.0mm,

4.6mm,10mm, 21.2mm, 30mm, 50mm,长度为 50mm, 100mm, 150mm, 250mm

可供应的填料粒径为 10u

 

十、一些溶剂的UV 截止波长

 

溶剂

UV 截止波长

溶剂

UV 截止波长

HEX

200nm

IPA

205nm

EtOH

210nm

MeOH

205nm

ACN

190nm

H2O

小于 190nm

DCM

233nm

EtOAc

256nm

MtBE

210nm

THF

212nm

 

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