菲罗门多糖型手性色谱柱的使用及维护
菲罗门手性色谱柱用户必备
菲罗门 Chiral 多糖型手性柱的使用及维护
一、手性固定相一览表
正相涂敷型固定相 |
Chiral ND,ND(2), NQ(2),NS(2),NT(2),NX(2), NY(2),NZ(2), MB(2), MC(2), MF(2), MG(2), MD,MD(2),MJ(2),MQ(2),MX(2), MZ(2) |
正相键合型固定相 |
Chiral INA, INB, INC, INJ |
反相涂敷型固定相 |
Chiral ND(2)-RH, NQ(2)-RH, NS(2)-RH,NX(2)-RH, NY(2)-RH,NZ(2)-RH,MD(2)-RH, MJ(2)-RH,MQ(2)-RH,MX(2)-RH, MZ(2)-RH |
二、常用优化峰形的添加剂的选择(正相,反相,SFC 都可使用)
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酸性样品 |
碱性样品 |
常规一般使用 |
三氟乙酸,甲酸 (0.1%-0.5%) |
二乙胺 (0.1%-0.5%) |
考虑继续调整峰形使用 |
甲磺酸 (0.1%) |
三乙胺、乙醇胺、正丁胺 (0.1%-0.5%) |
特别需要时,酸性与碱性添加剂可以同时添加,建议各 0.1% |
||
添加剂适合正相以及 SFC 超临界流体,以及反相(反相应用时,建议 0.05%-0.1%) |
三、正相涂敷型手性固定相常用起始条件
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1 |
2 |
起始条件 |
HEX:IPA=80:20 |
HEX:EtOH=80:20 |
调整范围 |
HEX 99%至 50%之间 |
HEX 99%至 50%之间 |
HEX:正己烷,IPA:异丙醇,EtOH:无水乙醇 |
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HEX 比例增加,保留时间会变长 |
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IPA 与 EtOH 一般比例不超过 50%,遇到极性特别大的样品,允许最高至 95%,正常 情况控制在 50%以下 |
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起始柱温为 25℃,起始流速建议在 0.8ml/min 左右。有条件的情况下,温度在 5-25℃ 内调整,对分离度可能产生大的影响。温度低有时利于拆分,温度高,出峰快,峰形 可能更尖锐 |
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Chiral MF(2), Chiral MG(2)流动相中不能用乙醇 |
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正相涂敷型手性固定相不能接触下列溶剂:甲基叔丁基醚(MtBE),二氯甲烷(DCM), 四氢呋喃(THF),乙酸乙酯(EtOAc),氯仿(CHCl3),丙酮等 |
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1 |
2 |
起始条件 |
HEX:IPA=80:20 |
HEX:EtOH=80:20 |
调整范围 |
HEX 99%至 50%之间 |
HEX 99%至 50%之间 |
|
3 |
4 |
起始条件 |
MtBE:EtOH=98:2 |
HEX:DCM=50:50 |
调整范围 |
MtBE 98%至 60%之间 |
HEX 85%至 50%之间 |
|
5 |
6 |
起始条件 |
HEX:THF=70:30 |
HEX:EtOAc=50:50 |
调整范围 |
HEX 99%至 70%之间 |
HEX 99%至 50%之间 |
|
7 |
8 |
起始条件 |
HEX:CHCl3=30:70 |
ACN:IPA(或 MeOH)=100:0 |
调整范围 |
HEX 60%至 100%之间 |
ACN 100%至 90%之间 |
HEX 比例增加,保留时间会变长 |
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除了上述溶剂,溶解与洗脱的必要性下,丙酮以及 1,4 二氧六环也可使用 |
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起始柱温为 25℃,起始流速建议在 0.8ml/min 左右。有条件的情况下,温度在 5-25℃ 内调整,对分离度可能产生大的影响。温度低有时利于拆分,温度高,出峰快,峰形 可能更尖锐 |
五、反相手性固定相常用起始条件
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酸性及两性化合物 |
碱性化合物 |
中性化合物 |
水相 40% |
0.1%甲酸水 |
0.1% TFA |
水 |
0.1% TFA 水 |
PH=2 100mM 高 氯酸钠水溶液 |
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PH=2.5 50mM 磷酸 缓冲盐 |
PH=2.5 100mM 六 氟磷酸钾水溶液 |
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0.1%磷酸水 |
20mM 碳酸氢铵水 溶液(PH=9) |
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PH=2 100mM 高 氯 酸钠水溶液 |
20mM 碳酸氢铵水溶液(PH=9),含0.1% DEA |
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PH=2 100mM 六 氟 磷酸钾水溶液 |
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有机相 60% |
ACN, MeOH, IPA |
常规清洗 |
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HEX:IPA=80:20 0.4ml/min 1-2 小时并直接保存 |
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柱效下降,峰形不正常时可能的特殊残留物清洗,再生 |
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酸性残留 |
碱性残留物 |
性质不确定的残留物 |
EtOH(0.1% DEA) 0.2ml/min 2 小 时 |
EtOH(0.1% TFA) 0.2ml/min 2 小 时 |
第 1 步 EtOH(0.1% TFA) 0.2ml/min 2 小 时 |
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第 2 步 EtOH(0.1% DEA) 0.2ml/min 2 小 时 |
清洗完毕后,再用 HEX:IPA=80:20 0.4ml/min 1 小时,并按 COA 测试后直接保存 |
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EtOH 不适用于 Chiral MF(2)与 Chiral MG(2)固定相。Chiral INB, INC 可用 EtOAc 再生 |
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说明:如果是柱头堵塞与污染,可以 0.2ml/min 流速倒冲 |
七、反相涂敷型与键合型手性柱的清洗与保存
常规清洗 |
ACN:H2O=10:90 0.5ml/min 1 小时,ACN:H2O=90:10 0.5ml/min 1 小时,保存于 ACN:H2O=75:25(或 60:40)体系中 |
柱效,柱压,峰形问题时,特殊残留物的清洗,再生 |
第1步:MeOH:H2O=10:90(含 0.1% TFA ) 0.2ml/min 1 小时 |
第2步:MeOH:H2O=90:10(含 0.1% TFA ) 0.2ml/min 1 小时 |
第3步:MeOH:H2O=99:1(含 0.1% TFA ) 0.2ml/min 2 小时 |
第 4 步:ACN:H2O=75:25 0.5ml/min 30 分钟,并按 COA 测试后直接保存 |
说明:如果是柱头堵塞与污染,可以 0.2ml/min 流速倒冲 |
八、手性色谱柱启用与切换的注意
所有正,反相手性柱启用时,建议流动相下 0.2ml/min 流速先运行 10 分钟,再提升到 0.5ml/min 流速运行 5 分钟,再提升到需要运行的流速 |
正相涂敷型与键合型手性柱,都可以在正相体系,SFC 体系(甲醇与液态二氧化碳体系) 以及 PO 极性体系(纯 ACN 或纯 MeOH 为流动相,或者含 5%的 IPA)切换使用。从一种体系切换到另一种体系时,需用 20 倍柱体积的 IPA 以 0.2ml/min 冲洗以切换。按 250*4.6mm 柱计算,20 倍柱体积约 50ml |
键合型手性柱,出厂在正相体系中,如果要转化为反相柱使用,需用 20 倍柱体积的 IPA 以 0.2ml/min 冲洗后,再用反相体系冲洗转化为反相柱,之后按反相柱的操作进 行。一旦转化为反相手性柱,则不能再切换回正相 |
适用 PH 范围为 2-9 |
适用温度范围为 0-40℃ |
适用压力上限为 300bar |
可供应色谱柱,制备柱产品的粒径为 3u, 5u, 10u,内径为 2.1mm, 3.0mm, 4.6mm,10mm, 21.2mm, 30mm, 50mm,长度为 50mm, 100mm, 150mm, 250mm |
可供应的填料粒径为 10u |
十、一些溶剂的UV 截止波长
溶剂 |
UV 截止波长 |
溶剂 |
UV 截止波长 |
HEX |
200nm |
IPA |
205nm |
EtOH |
210nm |
MeOH |
205nm |
ACN |
190nm |
H2O |
小于 190nm |
DCM |
233nm |
EtOAc |
256nm |
MtBE |
210nm |
THF |
212nm |
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