臻准生物数字PCR助力病毒性脑膜炎检测!

专家共识摘要

背景：

病毒性脑炎主要指脑实质受到侵袭而产生炎症性病变，病毒性脑膜炎主要指软脑膜出现弥漫性炎症，病毒性脑（膜）炎的主要临床表现为发热、头痛、抽搐、意识障碍等。WHO统计数据显示，全球每年病毒性中枢神经系统感染的发病率约为3.5/10万~7.4/10万，以此估算我国的病毒性脑（膜）炎病例年均在5万~10万例。近20年病原体分子诊断技术相较于以往的血清学及病毒分离等方法能更敏感、特异地识别鉴定病毒性脑（膜）炎相关病原体，但仍有约50%~60%的病毒性脑（膜）炎病因不清。病毒性脑（膜）炎的诊断除了受到技术上的限制，还受到检测试剂、样本类型及检测时间窗口等诸多因素的制约。

引起病毒性脑（膜）炎的病原体种类:

1. 人疱疹病毒（human herpes virus，HHV）：以单纯疱疹病毒性脑炎为代 表的疱疹病毒性脑炎仍是全球最常见的散发性脑炎（同意率100%）。

2. 肠道病毒：肠道病毒是引起我国儿童群体病毒性脑膜炎的重要病原体（同意率100%）。

3. 虫媒病毒：我国乙脑发病率逐年下降，但仍是虫媒病毒引起的最重要的病毒性脑炎（同意率100%）。

4. 其他引起脑（膜）炎的病毒：主要包括呼吸道病毒、及人双埃可病毒（humanparechovirus，HPeV）、狂犬病毒（rabies virus，RABV）等。

样本采集建议：

1. 应尽量采集患者急性期的脑脊液样本，脑脊液标本主要用于病毒核酸检测（同意率89%）；

2. 应尽量采集患者急性期、恢复期双份血清，血清标本主要用于抗体的测定（同意率95%）；

3. 脑脊液抗病毒抗体检测要严格遵循试剂适用范围（同意率95%）。

检测技术建议：

1. 病毒性脑（膜）炎病原临床检测技术主要有病毒核酸检测和抗体检测（同意率100%）；

2. 脑脊液病毒核酸检测包括PCR与mNGS，是目前病毒性脑（膜）炎病因确诊的主要方法（同意率100%）；

3. 抗病毒抗体（IgM）检测对乙型脑炎、西尼罗脑炎以及蜱传脑炎具有重要诊断意义（同意率100%）。

鉴于病毒性脑（膜）炎的病原体种类繁多，并可能存在合并感染，因此上述PCR技术虽然能覆盖常见病原体，但通常每个体系仅能检测单一病原体，显然不能满足临床病例的检测需求。近年来，多重PCR检测技术已成为常用的核酸检测技术。此外，数字PCR因其具有超高敏感性和绝对定量能力，在病毒性脑（膜）炎检测中的应用也逐渐增加。

数字PCR检测脑脊液中病毒的优势

病毒性脑膜炎是病毒性中枢神经系统感染的常见疾病，一般急性起病，几小时内病情迅速恶化，主要表现为发热、头痛、呕吐及脑膜刺激征。脑和脊髓一旦受到感染则后果严重。通过对腰椎穿刺脑脊液的分析可提供明确诊断。快速地鉴别诊断与早期治疗均有助于降低患者的死亡率和致残率。

数字PCR是一种新型定量技术，通过将一个标准PCR反应体系分配到大量微小的反应器中 ，实现“单分子模板PCR扩增”，对阴阳孔数的统计，最终经软件计算出目标DNA分子的浓度。此技术具有灵敏度高，精确度高以及耐受性好等优点，无需制备标准品即可直接获得靶分子的浓度或拷贝数。在脑脊液中早期病毒载量低，数字PCR凭借其高灵敏度完成精准定量分析，实现病原体的早期检测诊断和病程监控。

数字PCR检测脑脊液中HPV-3型病毒RNA

在所有浓度下，用一步RT-dPCR定量的HPeV3拷贝数均为用两步RT-dPCR定量的三分之一到一半。

两步RT-dPCR对HPeV3 RNA的检测限低于实时荧光定量RT-PCR。

通过对实时RT-PCR阴性的脑脊液样本的两步RT-dPCR分析，成功检测到HPeV3 RNA。

检测结果：

两步RT-dPCR可以成为检测低拷贝数样本中HPeV3 RNA的有用工具。两步RT-dPCR可以提高低病毒载量样本中HPeV3 RNA的检测率，从而提高HPeV3感染患者的诊断和管理。

*文献引用:Performance of a real‑time PCR‑based approach and droplet digital PCR in detecting human parechovirus type 3 RNA.

臻准解决方案

臻准生物可以提供多种病原微生物检测方案，使用数字PCR方法直接检测脑膜炎病原体的试剂盒，可以提升检测准确性和检测效率，为病症的治疗提供快速可靠的指导。

在病毒性脑膜炎的检测领域，臻准已有成熟的解决方案。

病毒性脑膜炎检测试剂盒

除了病毒性脑膜炎外，臻准生物还研发出了多样化的细菌真菌相关的脑膜炎解决方案！

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