Cielo™ 实时荧光定量PCR系统可快速可靠地检测新冠病毒

在应对病毒性大流行疾病时，为了有效控制病毒传播和减少感染人群，快速且可靠的诊断是至关重要的。那么目前检测COVID-19的 "黄金标准 "依赖于一种成熟的技术，即反转录定量聚合酶链反应，也叫RT-qPCR。简而言之，这一程序包括RNA提取、逆转录成互补DNA或cDNA，以及用热循环仪对转录本（病毒基因组的特异性）进行实时定量。

为了早期检测和诊断，实时荧光定量PCR仪必须能够检测非常少量的病毒RNA。研究表明，检测限(LOD)或以>95%置信度检测到的最低RNA浓度，表示每1μL可能只有1拷贝的病毒RNA。因此，我们准备用COVID-19 RNA来确定Azure Cielo™的LOD。

材料和方法

 Cielo™ 实时荧光定量PCR系统的LOD或分析灵敏度使用FDA批准的COVID-19 genesig® Real-Time PCR assay进行检测，如使用说明书（IFU）所述。使用试剂盒提供的阳性对照模板（PCT）生成6点标准曲线，如下所示：

▲ 表1. PCT系列稀释液

SARS-CoV-2全基因组RNA从欧洲病毒全球档案馆（EvaG）获得，并按照IFU中的描述进行连续稀释，每个稀释液进行20次重复。

结果和讨论

通过表1的PCT稀释液得到标准曲线（图1），将病毒RNA/μL的拷贝数与Cq值关联起来。

▲ 图1. 标准曲线

数据显示，在12.5cp/μL、1.25cp/μL和0.625cp/μL时， Cielo™ 实时荧光定量PCR系统均检测到20/20（100%）的重复，Cq平均值分别是30.49（图2，绿色）、33.66（图2，黄色）和34.80（图2，橙色）。在0.06cp/μL时，检测到12/20（60%）的重复，Cq平均值37.12（图2，红色）。

▲ 图2. 病毒拷贝数与Cq值的关系

结果表明，针对SARS-CoV-2 RNA的检测， Cielo™实时荧光定量PCR系统的最低检测限LOD为0.625cp/μL，表明 Cielo™ 实时荧光定量PCR系统可用于快速可靠地检测COVID-19。

 Cielo™实时荧光定量PCR系统

 Cielo™实时荧光定量PCR系统配备高品质温度模块，采用光纤和CMOS的检测系统，高能LED的激发，提供高灵敏和可靠的数据。