服务简介

      双特异性抗体(biospecific antibody， heteroconjugateantibody)是一类具有双功能的杂交抗体分子，具有两个不同的抗原特异性结合的Fab段，能与不同的配体结合，通过特异性结合肿瘤抗原同时结合不同的效应细胞和分子，达到定向杀伤肿瘤细胞的作用。

1.1含有Fc区的双特异性抗体

     抗体的Fc结构域的生物学功能有：抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)和补体介导的细胞毒作用(CDC)。双特异性抗体的制备技术手段有以下几种：

     Triomabs：Triomabs通过Fv功能区分别结合肿瘤细胞及T细胞，通过Fc功能区募集表达FcR的功能细胞，如NK细胞、单核细胞、巨噬细胞、粒细胞及树突状细胞等，形成复合体，刺激T细胞分泌细胞因子清除肿瘤细胞，因此Triomabs又被称为三功能抗体。Triomabs双特异性抗体技术平台由德国Fresenius和Trion Pharma公司合作开发。

     Knobs-into-holes：这项技术由Genentech公司开发。具体方法是将其中一个抗体的重链CH3区366位体积较小的苏氨酸(T)突变为体积较大的酪氨酸(Y) ，形成突出的“Knobs”型结构(T366Y);同时将另一个抗体重链CH3区407位较大的酪氨酸(Y)残基突变成较小的苏氨酸(T)，形成凹陷的“holes”型结构(Y407T) ; 利用“Knobs-into-holes”结构的空间位阻效应实现两种不同抗体重链间的正确装配。突变后，产品正确装配率由野生型的57%提高至92%，能够满足规模化生产的要求。但重链CH3的这一改构方式降低了抗体结构的稳定性，为了克服这一缺点，研究者通过噬菌体展示技术进行随机突变筛选，构建了更为稳定的“3 + 1”模式Knobs-holes结构 : 即T366W突变形成突出的“Knobs”型，3个氨基酸突变(T366S，L368A和Y407V)形成凹陷的“holes”型。Knobs-holes结构设计有利于2种异源抗体重链的装配。

     Crossmab: Crossmab技术的代表产品为罗氏公司的RG7221和RG7716，两者均为抗Ang-2/VEGF双特异性抗体。其结构是在“knobs-holes”结构基础上通过链交换技术，将Ang-2抗体Fab结构域中的CL与CH1互换，而VEGF抗体的Fab结构则保持不变。经过改造的Ang-2抗体轻链不易与血管内皮生长因子( VEGF)抗体的重链发生错配，同时“knobs-holes”结构可促进两条重链异源二聚化。

     Ortho-Fab:该技术是Lewis等报道的一种克服轻链错配的设计策略。Lewis等通过计算机模型化并结合X晶体衍射技术对VH/VL及CH1/CL进行正交互补突变设计，从而减少轻链错配现象，将此技术结合重链异源二聚化方法，可以实现双特异性抗体在单一细胞内的高效表达。近期，静电转向技术(electrostatic steering)也被应用进行Orthogonal Fab双特异性抗体的构建。

     IgG-scFv及scFv2-Fc：IgG-scFv双特异性抗体是将单链抗体(scFv)连接在正常IgG抗体分子的C末端，通过分子两端的CDR区与靶分子结合实现双功能。而scFv2-Fc分子与IgG-scFv结构类似，是将两个scFv分子分别连接在Fc功能区的两端，形成双功能区。

     1.2不含Fc区的双特异性抗体

     另一类双特异性抗体不含Fc区，其优点是相对分子质量小、可以在原核细胞中表达且更易穿过组织及肿瘤细胞到达靶位点 ; 缺点是由于不含抗体Fc区，不能介导相应的生物学功能且半衰期通常较短，如已上市的Blinatumomab血液半衰期只有2.11h，需要通过注射泵连续给药28d。目前，此类双特异性抗体主要有BiTE，DART，TandAbs，bi-Nanobody等。

     BiTE双特异性抗体：德国Micromet公司开发的BiTE系列产品是不含Fc区结构类双特异性抗体的典型代表。BiTE是将抗CD3单链抗体(scFv)与不同抗肿瘤细胞表面抗原的单链抗体通过肽段进行连接而获得，可同时结合CD3阳性T细胞及肿瘤细胞。BiTE通过结合T细胞表面CD3，将T细胞募集至肿瘤细胞表面，从而激活T细胞进行肿瘤杀伤。

     BiTE技术研究者克服了scFv稳定性差、表达量低、溶解性低等生产问题，成功实现了BiTE产品的商业化。bi-Nanobody双特异性抗体：Nanobody是Ablynx 公司参考骆驼及美洲驼的单域抗体结构(无轻链及CH1区)，通过结构简化，仅保留VH区而开发的专利平台技术。在实际应用中，Nanobody是将2个或多个抗体分子的VH区进行连接而实现多特异性结合。该类产品的主要优点是分子小、稳定性高、易于人源化、易于连接，并可通过多种途径进行给药。此外，在分子设计时可选择加入与人血白蛋白结合的功能区，将半衰期延长至2～3周，并且可以通过白蛋白将药物运输至靶位点。

     普健生物具有经验丰富的双特异性抗体制备团队，能够提供以上双特异性抗体类型的设计

服务内容

案例展示

普健生物（武汉）科技有限公司于2012年在武汉成立，作为武汉国家生物产业基地指定的光谷抗体发现与筛选公共服务平台，具备优越的技术实力和国际化发展的战略格局，专注于重组蛋白、抗体、诊断原料、抗体药物发现等自主技术平台的建设和下游生物医药产品的战略合作。

公司大楼坐落于东湖新技术开发区神墩四路, 这里绿叶繁茂，道路宽敞，周围有一众生物科技型高新企业。普健生物作为一员加入此处，为周遭增添了一抹亮丽的色彩。

公司立足于生命科学领域，自主建立三大完善的技术服务平台：生命科学研究平台、诊断原料开发平台、抗体药物研发平台。生命科学平台：拥有五大成熟高效的蛋白表达系统（枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞），鼠/兔单克隆抗体平台，可提供蛋白表达、分子构建-蛋白表达纯化-结构解析、抗体重组表达、鼠/兔单克隆抗体制备以及相关检测服务。诊断原料开发平台：拥有开放式化学发光自动平台，可缩短研发周期、降低开发成本与技术风险，为广大客户提供各种诊断核心原料开发。抗体药物发现平台以杂交瘤筛选与噬菌体展示技术为主，目前已完成构建并对外提供抗体筛选技术服务的文库有：新冠特异性抗体噬菌体文库、羊驼天然纳米抗体噬菌体文库、兔源天然抗体噬菌体文库、小鼠天然抗体噬菌体文库。同时也开发了大量的重组蛋白、抗体、工具酶、药物对照抗体、工业酶、诊断原料等相关产品。

目前已拥有的自主技术包括：哺乳动物细胞重组蛋白表达系统、稳定细胞株构建、噬菌体文库的构建以及淘选、DNA免疫技术、化学发光免疫诊断抗体筛选技术等等。截止目前已成功交付数万例与重组蛋白、抗体相关的技术委托研发，客户以及合作伙伴涵盖了国内外优秀的学术研究机构以及制药公司；并且与FIND（创新诊断基金会）、BAYER（拜耳作物科学）、广州呼吸健康研究院建立合作关系；与青岛大学附属医院医学研究转化中心，苏州系统医学研究所，广州再生医学与健康广东省实验室建立战略合作关系。

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