产品描述

MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium间质干细胞成骨诱导分化培养基，无血清，无异源，即用型完全培养基，诱导hMSC分化为成熟成骨细胞。适用于不同来源的hMSC，如骨髓、脂肪组织和脐带组织（hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT）。

MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium 10天以内快速诱导成骨，而MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium需要14-21天。

成骨结果

hMSC分化成骨后会矿化形成钙结节且有钙分泌，所以可以利用茜素红S (Alizarin Red S) 染色检视分化的成骨细胞。不同的细胞来源（类型、年龄、代数）所得到的分化效果会有差异

试剂盒组成

MSCgo™间质干细胞成骨诱导分化培养基

产品描述	储存	货号	规格
MSCgo™ Osteogenic Differentiation   Medium	2-8°C	05-440-1B	100ml
MSCgo™ Rapid   Osteogenic Differentiation Medium	2-8°C	05-442-1B	100ml

 

成骨实验所需材料

维持培养基

MSC NutriStem^® XF Medium: BI；05-200-1，05-201-1

MSC Attachment solution XF: BI；05-752-1，05-760-1

ž 注：若是血清体系、血小板体系或其他MSC培养体系也可以使用。

分化培养基

MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium：BI；05-440-1

MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium：BI；05-442-1

染色试剂

建议使用Vivacell品牌，间充质干细胞成骨分化染色试剂盒，货号：C37C0-0150。

成骨诱导分化操作

1        接种hMSC：用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘，每孔加入0.5ml MSC NutriStem^® XF，接种6x10⁴细胞 (3x10⁴ cells/cm²)。

ž 此处仅为针对成骨诱导的细胞接种操作，MSC NutriStem^® XF Medium详细操作步骤请参考其说明书。

ž 若使用血清体系、血小板体系或其他MSC培养体系，可以略过包被步骤。

2        置于37°C，5% CO₂细胞培养箱中培养。

以成骨分化培养基诱导分化

1        培养24h后确认细胞融合度达到80-90%，将维持培养基吸除，每孔（24孔盘）加入0.5ml分化培养基。

ž 若细胞融合度<80%，继续再培养一天。

2        置于37°C，5% CO₂培养箱中培养10-21天，每2-3天换液。

ž 培养时间越长，会有越多矿化的细胞，ARS染色更明显。

3        成骨评价：使用2%的ARS染色液。

染色步骤

间充质干细胞成骨分化染色试剂盒  英文名称：MSC Osteo-Staining Kit

 

【预期用途】

适用于间充质干细胞成骨分化后的骨细胞染色，尤其适合作为BI MSCgo^TM Osteogenic XF ( BI 05-440-1B 或 05-442-1B) 成骨分化后的染色验证之用。

【检验原理】

茜素红S (Alizarin Red S)是一种常用的示钙染剂，广泛用作生物医学样本中含钙目标物的染色检验。游离的钙离子可与茜素红S形成红色沉淀；固着的钙则会被直接染成红色。

在成骨诱导分化作用下，间充质干细胞 (MSC, Mesenchymal Stem Cell) 会被逐渐分化为骨细胞(Osteoblasts)，包括钙化骨节(钙盐结晶体)的形成 (Calcium nodules formation) 和细胞的泌钙反应 (Calcium secretion)。两者均可被茜素红S染成红色。

【检验方法】

以操作一个T25 flask为例：

1. 吸弃分化培养基，加入1 ml DPBS (BI 02-023-1ACS) 轻轻润洗培养瓶底面。

2. 吸弃DPBS，加入3 ml Fixation solution (C37C10020)，轻轻晃动培养瓶，使底面浸润均匀。室温下静置30 分钟。

3. 吸弃Fixation solution；加入3 ml Wash I (C37C20050)，润洗细胞2-3次。

4. 吸弃Wash I，加入3 ml Staining Solution (C37C30020)，底面浸润均匀，室温染色30分钟。5. 吸弃Staining Solution，加入3 ml Wash II (C37C40050)，润洗细胞2-3次。

6. 吸弃Wash II，加入1 ml Inspection Solution (C37C50010)，置于显微镜下观察、拍照 (分化后的骨细胞会被染成橘红色)。

【检验结果的解释】

在显微镜下，可观察到钙化骨节与茜素红染料结合后呈现红色或橘红色(如下图所示)。被染色细胞的数量和染色的深度会受到多种因素的影响，例如：细胞类型、细胞代数、分化时间和培养条件等。