RTL 逆转录酶 (RNase H+)
- HMD5301S、HMD5301L、HMD5301D
- 武汉瀚海新酶
- 湖北省武汉市
- 现货
- 750U
- 7500U
- 11250U
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- 2022-04-30 12:09:37
武汉瀚海新酶生物科技有限公司
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RTL 逆转录酶(RNase H+)是一种依赖 RNA 的 DNA 聚合酶，缺少 3′ → 5′ 的核酸外切酶活性，其具有 RNase H 活性。该酶可利用 RNA（cDNA 合成）或 ssDNA作为模板，合成一条互补的 DNA 链，可应用于第一链cDNA 合成、特别适用于 RT-LAMP(环介导等温扩增)。
产品组分
| 组分 | HMD5301S | HMD3301L |
| RTL 逆转录酶 （RNase H+） （15 U/μL） | 50 μL | 500 μL |
| 10 × HH RTL Buffer | 400 μL | 2 x 2 mL |
| MgSO4 (100 mM) | 1.5 mL | 1.5 mL |
高浓度：
| 组分 | HMD3301D |
| RTL 逆转录酶（RNase H+） （450 U/μL） | 25 μL |
| 10 x HH RTL Buffer | 1 × 5 mL |
| MgSO4 (100 mM) | 2 × 1.5 mL |
| RTL Dilute Buffer (Glycerol free) | 1 mL |
运输与保存方法
≤0℃运输；-20℃保存，避免反复冻融，产品 有效期 24 个月。
单位定义
以 Poly (rA)·Oligo (dT)为模板/引物，在 50℃， 20 min 条件下，掺入 1 nmol 的 dTTP 为酸不溶性物质所需要酶量定义为 1 个活性 单位 (U)。
质量控制
核酸内切酶残留检测：30 U 本酶和 4 μg pUC19 DNA 在 37℃下孵育 4 h，琼脂糖凝胶 电泳 DNA 谱带不发生变化。
核酸外切酶检测：50 μL 反应体系中加入 30 U 本酶，1 µg 的 Lambda-HindIII DNA，在 37℃ 下孵育 16 h，琼脂糖凝胶电泳 DNA 谱带不发 生变化。
RNase 残留检测：30 U 本酶和 0.8 μg MS2 RNA 在 37℃下孵育 1 h，RNA 电泳谱带不发 生变化。
逆转录反应体系：
| 组分 |
| Template RNAⓐ |
| Oligo(dT)23（50 μM）or Random Primer Mix（60 μM） |
| dNTP Mix (10 mM each) RNase 抑制剂（40 U/μL） |
| RTL 逆转录酶 （RNase H+） (15 U/μL) |
| 10 x HH RTL Buffer |
| 10 x HH RTL Buffer |
| Nuclease-free Water |
a:
| Total RNA | 1ng - 1μg |
| Poly(A) RNA | 50 pg - 100 ng |
反应程序：
| 温度 | 时间 |
| 25℃ⓐ | 5 min |
| 55℃ⓑ | 10 minⓑ |
| 80℃ | 10 min |
ⓐ如使用 Random Primer Mix 增加该孵育步骤
ⓑ如使用特异性的目的基因引物调整本步骤温度为 42-55℃
ⓑ可在 10-30 min 间调整。延长逆转录时间有助于获得更长的 cDNA (>5 kb)
RT-LAMP 反应体系
| 组分 | 体积 | 终浓度 |
| Template | RNA optional | ≥10copies |
| dNTP Mix (10 mM) | 3.5 μL | 1.4 mM |
| dNTP Mix (10 mM) | 3.5 μL | 1.4 mM |
| FIP/BIP Primers (25×) | 1 μL | 1.6 μM |
| F3/B3 Primers (25×) | 1 μL | 0.2 μM |
| LoopF/LoopB Primers (25×) | 1 μL | 0.4 μM |
| RNase 抑制剂（40 U/μL） | 0.5 μL | 20U/Rxn |
| RTL 逆转录酶（RNase H+） (15 U/μL) | 0.5 μL | 300 U/mL |
| BstL DNA 聚合酶 (8 U/μL) | 1 μL | 320 U/mL |
| MgSO4 (100 mM) | 1.5 μL | 6 mM (总共 8 mM) |
| 10×HH RTL Buffer /10×HH BstL Buffer | 2 μL | 1 ×(含有 2 mM 镁离子) |
| Nuclease-free Water | Up to 25 μL |
体系配制完成，涡旋混合均匀，60-65 ℃反应 1 h。
