DS-10脱盐柱 葡聚糖凝胶脱盐预装柱   一、DS-10脱盐柱简介 DS-10脱盐柱是便捷的手动脱盐柱，所有操作不需要借用仪器即可完成，脱盐效率高，方便快捷。该脱盐柱内含8.5mlCrystadex G-25填料，其孔径排阻极限为5000,分子小于孔径的则会进入到凝胶孔内，起整个路径是整个凝胶体积；分子大于孔径的则不会进入凝胶孔内，只在凝胶的外水体积中流过，所以，大分子会较小分子先流出。蛋白回收率95%左右（不同样品有可能存在差异），除盐效率＞97%。该脱盐柱可以用来去掉大分子（>5000）中的盐、标记物或其他小分子杂质等，也可以用来交换缓冲溶液。该脱盐柱上样体积为1.0-2.5ml。   二、操作步骤： 平衡：打开上下盖帽，将柱子上面的保护液倒掉，加入平衡缓冲液，柱里的保护液会自然低落，继续加入缓冲溶液，一边滴一边加，加入3-5个柱体积后，里面的保护液被完全置换；有紫外检测器的还需要等到直到紫外吸收基线平稳为止，这一步是为了尽量去除层析柱中的保护液。 进样：在柱子上层缓冲溶液完全进入柱床后，下面没有液体流出时可以加入样品，并开始计算体积。DS-10的最大进样体积为2.5ml，样品体积不足2.5ml的，可以在样品完全进入柱床里面后添加缓冲液到总体积2.5ml。 洗脱：继续加入缓冲液进行洗脱，根据图1洗脱曲线进行洗脱。 注：这里所说的缓冲液是实验者所希望的缓冲液，比如您希望蛋白脱盐之后的溶液是去离子水，那么这里的缓冲液就是去离子水。 注2：洗脱规则是洗脱体积一般比样品体积大约20%左右，也就是说脱盐后的体积是原样品体积的120%左右。可以根据进样体积选择收集终止时间。比如进样2ml，从2.8ml开始收集，到5.2 ml停止收集，如果样品体积是2.5ml，则应该收集2.8-5.8ml之间的洗脱液，如图1。 再生保存：该层析柱虽为一次性使用，但也可以重复再生使用。 再生步骤如下： 4.1去离子水洗柱5个体积 4.2用0.5M氢氧化钠清洗2-3个体积 4.3用去离子水清洗3个体积 4.4再用20%乙醇洗柱5个体积 4.5再生时因为加入氢氧化钠和乙醇会使流速会变慢，需要耐心等待。 图1     注：进样2.5ml完全进入柱床后，在加入3.5ml的缓冲溶液洗脱，并开始收集洗脱液，我们可以通过去掉起峰和拖尾部分样品达到提高蛋白浓度，减少洗脱体积的效果。