细胞流式凋亡
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- 2022-05-23 14:10:00
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凋亡和坏死，是常见的细胞死亡的两种方式，它们有着截然不同的特征。凋亡是细胞程序性死亡的主要表现形式，是一个主动性的生理反应机制；坏死则是细胞对严重损伤的一种被动反应和变性过程。
凋亡涉及一系列复杂的生理生化反应，最终导致细胞的解体。凋亡细胞的许多改变是特征性的，甚至是唯一与凋亡相关的。
细胞与胞核固缩是凋亡早期发生的形态学变化，这些改变与细胞骨架的特异性解体有关。核固缩伴随的染色体固缩，有显著的形态学特点。碎裂的核片断可以被胞膜包裹游离出细胞外，成为凋亡小体，并被周围细胞吞噬。染色质的这些特征性变化，可以用显微镜直接观察，或用一些荧光染料染色，在荧光显微镜下观察或进行流式细胞分析。
Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白，参与细胞内的信号转导。但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性。
Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。用带有红色荧光的荧光探针APC标记的Annexin V，即Annexin V-APC，就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现橙红色荧光。对于坏死细胞，由于细胞膜的完整性已经丧失，Annexin V-APC可以进入到细胞浆内，与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸结合，从而也使坏死细胞呈现红色荧光。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及坏死细胞区分开来。
凋亡涉及一系列复杂的生理生化反应，最终导致细胞的解体。凋亡细胞的许多改变是特征性的，甚至是唯一与凋亡相关的。
细胞与胞核固缩是凋亡早期发生的形态学变化，这些改变与细胞骨架的特异性解体有关。核固缩伴随的染色体固缩，有显著的形态学特点。碎裂的核片断可以被胞膜包裹游离出细胞外，成为凋亡小体，并被周围细胞吞噬。染色质的这些特征性变化，可以用显微镜直接观察，或用一些荧光染料染色，在荧光显微镜下观察或进行流式细胞分析。
Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白，参与细胞内的信号转导。但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性。
Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。用带有红色荧光的荧光探针APC标记的Annexin V，即Annexin V-APC，就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现橙红色荧光。对于坏死细胞，由于细胞膜的完整性已经丧失，Annexin V-APC可以进入到细胞浆内，与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸结合，从而也使坏死细胞呈现红色荧光。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及坏死细胞区分开来。
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