组织免疫组化(IHC) 

 

实验方法

1）石蜡切片自37℃恒温箱过夜烤片后取出，室温放置5分钟后，双蒸水浸泡5分钟，0.01M PBS（pH7.2-7.4）浸洗5分钟×3次。

2）加入EDTA缓冲液，微波至沸腾拿出微波炉，自然冷却至室温。

3）0.1% triton X-100透膜10分钟。PBS洗三次。

4）3%过氧化氢（in PBS）RT,15min。重复此步骤操作1次。

5）用吸水纸擦干组织周围的玻片，用组化笔画圈，滴加免疫羊血清封闭30分钟（室温）或过夜（4℃）。

6）倾去封闭血清，不用清洗，直接滴加稀释好的一抗，4℃湿盒过夜。次日取出，倾去一抗，PBS清洗三次。

7）滴加稀释的二抗，37℃孵育1h。倾去二抗，PBS清洗3遍。

8）加DAB显色剂，每样加上100ulDAB,5-20s内显微镜下观察有无特异性信号。显色后立即用蒸馏水冲洗终止反应。如无特异性表达可适当延长DAB显色时间。

9）苏木精染色液复染，蒸馏水洗2min，苏木精复染10s-15min，蒸馏水洗，盐酸酒精（70%乙醇：盐酸=99:1）分化20s，蒸馏水洗，稀氨水（1%）反蓝10s。流水冲洗，镜下观察。

10）脱水透明，95%乙醇5min，100%乙醇5min，2次（2瓶无水乙醇）.二甲苯Ⅰ10min二甲苯Ⅱ10min。封片，中性树胶封片。

实验周期：组织免疫组化（IHC）1-2周，组织免疫荧光（IF）-普通荧光显微镜观察1-2周（≤50个样本），组织免疫荧光（IF）-共聚焦荧光显微镜3周（≤20个样本）。

 

细胞生物学实验服务

 

v 细胞传代培养

v 原代细胞分离培养

v 细胞增殖

v 细胞凋亡

v 细胞周期

v 细胞迁移/侵袭

v 细胞流式分选

v 慢病毒包装/稳转系筛选

v 电生理检测

v 定制化细胞模型

 

分子生物学实验服务

v 生化检测

v HPLC/LC-MS

v 实时荧光定量PCR（qPCR）

v 重组载体构建

v 甲基化检测

v SNP检测

v 双荧光素酶检测

v 定点突变

v 原位杂交

v ELISA检测

v Western Blot（WB）

v 外泌体分离及鉴定

v Co-IP检测

v 凝胶迁移实验（EMSA）

v RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）

v 染色质免疫共沉淀技术（ChIP）

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