热启动 Taq DNA 聚合酶 （化学修饰）
- HMD0201S、HMD0201M、HMD0201L
- 武汉瀚海新酶
- 湖北省武汉市
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- 2022-04-27 23:17:22
武汉瀚海新酶生物科技有限公司
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- 热启动TaqDNA聚合酶
Taq DNA 聚合酶，是一种耐热的 DNA 聚 合酶，来源于水生栖热菌（Thermus aquaticus YT-1），该酶具有 5’→ 3’的聚合酶活性和双链 特异性 5’→ 3’的核酸外切酶活性。热启动 Taq DNA 聚合酶是在其基础上通过化学修饰而获 得。该酶通过化学修饰封闭低温以及室温的酶 活，经过 95℃热激活后，化学修饰基团水解 脱落释放酶活。从扩增体系配制到 PCR 扩增前，不会产生由于引物错误配对而形成的非特 异性扩增，最大程度降低非特异扩增和引物二 聚体的形成，提高扩增的灵敏度和特异性。
产品组分
| 组分 | HMD0201S | HMD0201M | HMD0201L |
| 5 × HH Taq Buffer | 2 mL | 4×2 mL | 8×5 mL |
| 热启动 Taq DNA 聚合酶（化学修饰） （5 U/μL） | 50 µL | 200 µL | 1000 µL |
- 运输与保存方法
≤0℃运输；-20℃保存。
单位定义
使用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模 板/引物，74℃，30 min 内，摄入 10 nmol 的 全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 个活 性单位(U)。
质量控制
- 核酸内切酶残留检测：10 U 的本酶和 4 μg pUC19 DNA 在 37 ℃下孵育 4 h，DNA 的电泳 谱带不发生变化。
- 5 kb λDNA扩增检测： PCR体系中加入1.25 U 本酶，200 μM dNTP，以 5 ng λDNA 为模板扩 增 25 个循环后，琼脂糖凝胶电泳，可见有单一的特异性 5 kb 条带。
- 核酸外切酶检测：50 μL 反应体系中加入 12.5 U 本酶，1 μM 5’- FAM 标记的寡核苷酸，37 ℃
孵育 30 min 无降解信号。
- RNase 残留检测：10 U 的本酶和 0.8 μg MS2 RNA 在 37℃下孵育 2 h，RNA 电泳谱带不发
生变化。
- 热失活：无
反应体系
| 组分 | 体积 |
| 模板 DNAa | optional |
| 10 µM 上游引物 | 0.5 μL |
| 10 µM 下游引物 | 0.5 μL |
| dNTP Mix (10 mM each) | 0. 5 μL |
| 5 × HH Taq Buffer | 5 μL |
| 热启动 Taq DNA 聚合酶 （化学修饰）（5 U/μL）b | 0.125 μL |
| 无核酸酶水 | Up to 25 μL |
a:
| DNA | 用量 |
| 基因组 | 1 ng – 1 μg |
| 质粒或病毒 | 1 pg - 1 ng |
b:酶量可在 0.1-0.5 μL 间 整。加大酶量在通 常情况下可提高扩增产量，但有可 会使特异 性下降。
反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性(热激活) a | 95℃ | 10 min | — |
| 变性 | 95℃ | 15 s-30 s | |
| 退火 b | 45℃-68℃ | 15 s-60 s | 30-35 Cycles |
| 延伸 | 68℃ | 1 kb/min | |
| 终延伸 | 68℃ | 5 min | — |
a:普通模板热激活（预变性）时间 10 min。如扩增不理想，可延长 95℃热 激活时间至 15min。
b: 建议的退火时间为 15-60 s，退火温度根据引物 Tm 确定一般在 45-68℃，一般设置为低 于引物 Tm 值 3-5℃即可。
