产品描述

rProtein G Seplife 4FF层析介质是蓝晓科技自主研发的一种新型亲和层析介质，是将重组蛋白G偶联到4%高流速琼脂糖凝胶过滤层析介质上，它可用于分离纯化细胞培养液或细胞提取物中不同种属的抗体或抗体的Fc片段。重组蛋白G高流速琼脂糖层析介质采用多位点活化偶联，有效减少了配基的脱落，用于lgG单克隆抗体的实验室规模和工业化大规模纯化，能迅速处理大体积样品，提高生产效率。

产品属性参数

说明书

使用方法

3.1 装柱

装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。

3.2平衡

用2～5个柱床体积的初始缓冲溶液进行平衡，直至pH和电导率保持不变。

3.3上样

样品的预处理：样品需先用0.45μm滤膜过滤，然后上样，以免堵塞层析柱。上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择，也可通过线性实验找到最佳上样量。

3.4洗脱

 一般利用降低pH进行洗脱：如0.1mol/L甘氨酸-HCl，pH3.0。洗脱后，应立刻中和缓冲液，将收集到的抗体溶液中和至中性（pH7.4左右），以维持抗体的生物活性，一般中和液为1mol/L Tris-HCl，pH8.5。

3.5 再生

首先用0.1mol/L，pH3.0柠檬酸钠缓冲液洗3～5个柱床体积，然后用2～3个柱床体积的平衡缓冲液清洗，最后将柱子置于2～8℃环境中。 

3.6在位清洗

（1）对于沉淀或变性物质，可先用2倍柱床体积的6mol/L的盐酸胍溶液进行清洗，然后用5倍柱床体积的PBS，pH7.4清洗，直至pH和电导保持不变。

（2）对于强疏水性蛋白、脂蛋白和脂质等，可先用3～4倍70%乙醇或2倍柱床体积的非离子去污剂（浓度0.1%）清洗，在37℃洗柱子1min，最后立即用平衡液洗5个柱床体积，直至pH和电导保持不变。

3.7存储

密封保存在4~8℃（保存溶液为20%乙醇）干燥、通风、清洁处，不可冷冻；用过的柱子保存在4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.8运输

运输中避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

4.注意事项

（1）该介质从冷室或冰箱中取出后最好在室温下恢复到室温，然后缓慢摇匀后装柱，以免产生气泡影响柱效。

（2）装柱时尽可能维持长径比5：3~2：1，长径过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径过小将导致样品和介质接触时间过少，吸附不充分，介质吸附蛋白量小。

（3）若上样液中抗体浓度过高，应用平衡缓冲液稀释至1~2mg/ml，以免上样浓度过高影响柱效。

（4）凝胶用低pH缓冲液洗脱的时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快洗到pH中性，以延长介质的使用寿命。

（5）通常介质使用后应用0.1M柠檬酸钠缓冲液（pH3.0）做再生处理，然而长期采用极端的洗脱条件会缩短介质的使用寿命。

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