支原体染色检测试剂盒
产品货号：R23155

产品规格：100ml

产品简介：
支原体染色检测试剂盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是一种经典的利用DNA荧光染色法检测支原体污染的试剂盒，其原理是当细胞发生凋亡时，染色质会固缩， Hoechst染色后在荧光显微镜下观察，正常细胞的细胞核呈正常的蓝色，而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染，颜色有些发白。
尚宝生物 Hoechst Staining Kit经常用于培养的贴壁或悬浮细胞以及组织切片的细胞凋亡检测。该试剂盒检测细胞含量范围一般为0.1～1×106之间。

产品组成：
名称 100T 保存条件
试剂(A): Hoechst 固定液 50ml 室温
试剂(B): Hoechst 染色液 50ml -20℃，避光
试剂(C): 荧光封片剂 5ml 4℃，避光






自备材料：
1.可观察蓝光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜
2.PBS或生理盐水
3.载玻片、盖玻片
4.预冷固定液：预冷的70%乙醇或4%多聚甲醛

操作步骤(仅供参考)：
(一)贴壁细胞
1.取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌的PBS或生理盐水洗涤3次，再用细胞培养液洗涤1次。将盖玻片置于6孔板或其他培养皿内，接种细胞培养过夜，使融合率约为50%～80%。
2.加入干预条件使细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入Hoechst固定液0.5ml，固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
3.去除固定液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。
4.加入Hoechst染色液0.5ml，孵育5min。也宜用摇床，或手动晃动数次。
5.弃染色液，PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。
6.滴一滴抗荧封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片剂，避免气泡。
7.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右，发射波长460nm左右。
(二)悬浮细胞
1.离心收集细胞样品于1.5ml离心管内并弃液，加入Hoechst固定液0.5ml，缓缓悬起细胞，固定10min或更长时间(亦可4℃过夜)。
2.低速离心去除固定液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min。洗涤时手动晃动数次。

3.低速离心离心后吸去大部分液体保留约50μl液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
4.稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
5.均匀滴上Hoechst染色液0.5ml，孵育5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。
6.弃染色液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体。洗涤时宜用摇床手动。
7.滴一滴抗荧光封片剂于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
8.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右，发射波长460nm左右。
(三)组织切片
1.常规包埋切片。用PBS或生理盐水洗2次，每次3min。洗涤时手动晃动数次。
2.均匀滴上Hoechst染色液0.5ml，孵育5分钟。
3.弃染色液，PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动。
4.将切片置于载玻片上，滴一滴抗荧光封片剂，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
5.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右，发射波长460nm左右。

注意事项：
1.荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。使用抗荧封片剂时也应避光操作。
2.在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当提高离心力或延长离心时间。
3.Hoechst染色液对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 12个月有效。亦可4℃保存, 1个月有效。