扩增子测序（脱靶位点验证）
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- 2022-12-12 14:17:58
珠海舒桐医疗科技有限公司
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扩增子测序
扩增子测序简介
随着基因编辑技术（尤其是CRISPR-cas9技术）的发展，科研人员使用传统的Sanger测序技术无法快速有效鉴定基因编辑效率。但是，通过对靶基因区域附近设计引物，进行PCR扩增，并对PCR产物进行高通量测序，可以快速高效的获得目标区域的突变频率信息，尤其是对低频突变的检测效果远远优于一代测序，性价比极高。
扩增子建库测序原理
技术路线
舒桐扩增子测序优势
- 优化引物设计，降低非特异性扩增；
- 同时检测上百个脱靶位点，相较于Sanger测序，脱靶率验证效率更高，也更加敏感； <li能检测到切割后产生的indel情况，可进行下游切割产物分析；< li="" style="box-sizing: border-box;">
- 可与本公司提供的GUIDE-seq及SITE-seq脱靶检测服务联合应用；
- 服务周期短，仅需半月。 </li能检测到切割后产生的indel情况，可进行下游切割产物分析；<>
| 服务项目 | 服务内容 | 报价 | 周期(工作日) | 交付内容 |
|---|---|---|---|---|
| 单位点扩增子建库 | 建库+上机+分析 | 1500元/样 | 15-20 | 原始数据+可视化结题报告 |
| 脱靶位点验证 | 建库+上机+分析 | 1500+位点*100元 | 20-30 | 原始数据+可视化结题报告 |
样品要求
- 转染CRISPR/Cas9后48-72h收取细胞，提取DNA；
- DNA样品总量：500ng-1ug，浓度50ng/ul以上；
- DNA样品纯度：OD260/280=1.8~2.0；
- DNA样品完整性：DNA无明显降解，需提供凝胶电泳检测胶图；
参考文献
- Fan, W. et al. Non-homologous dsODN increases the mutagenic effects of CRISPR-Cas9 to disrupt oncogene E7 in HPV positive cells. Cancer Gene Ther, doi:10.1038/s41417-021-00355-z (2021).
