荧光/光吸收法过氧化氢定量试剂盒
产品货号：26310
产品规格：100 次/500 次
产品简介：
本试剂盒用于定量分析细胞及酶水平的过氧化氢含量。
在过氧化物酶的存在下，Reagent A 能够与过氧化氢以 1：1 的比例反应，生成物有红色荧光，该荧光
可在激发光 571nm，发射光 585nm 处被监测（激发光亦可用 530-571nm 波长激发，发射光可用 580-590nm 监
测）。本试剂盒最低检测限为 50nM 过氧化氢。
包装清单:
产品信息 100 次包装 500 次包装 储存条件
Reagent A 0.05ml 0.25ml -20℃
Reagent B 0.05ml 0.25ml -20℃
10×Reaction Buffer 1.2ml 6ml 室温
10×KRPG Buffer 3.5ml 7ml 室温
操作步骤： 普通样品过氧化氢含量测定:
1.用超纯水将 10×Reaction Buffer 稀释为 1×Reaction Buffer。
2.于 96 孔板中每孔加入 94μl 1×Reaction Buffer。
3.于 96 孔板中加入 5μl 样品，不足 5μl 的用 1×Reaction Buffer 补足 5μl。
4.于 96 孔板中加入 0.5μl Reagent A，0.5μl Reagent B。
5.37℃避光孵育 5min。
6.用酶标仪激发光571nm，发射光585nm检测（激发光亦可用530-571nm波长激发，发射光可用580-590nm
监测），分析数据。
7.可选：除步骤 6 所示荧光检测，亦可在 560nm 处检测吸光度以用于数据分析。
8.背景扣除：除待测样品孔，需做空白孔（用 5μl 1×Reaction Buffer 代替样品）检测背景值。
细胞内过氧化氢含量测定：
1.Reaction mixture 制备：每个样品准备 100μLReaction mixture。包含：0.5μl Reagent A，0.5μl
Reagent B，10μl 10×KRPG Buffer，89μl 超纯水。根据实验样品数，准备适量 Reaction mixture。
2.将 100μl Reaction mixture 加入 96 孔板中，37℃避光孵育 5min 备用。
3.细胞样品制备：准备收集约 1.5×10
4个细胞于 1.5ml 离心管中，PBS 清洗后 3000rpm 离心 5min，
4.弃上清。
5.加入 20μL KRPG buffer 悬浮的细胞（约 1.5×10
4个细胞）于步骤 2 的 96 孔板中，37℃避光孵育
10min。如需空白对照，以 20μL KRPG buffer 代替细胞，作为空白对照孔。
6.用酶标仪激发光571nm，发射光585nm检测（激发光亦可用530-571nm波长激发，发射光可用580-590nm
监测），分析数据。
7.可选：除步骤 5 所示荧光检测，亦可在 560nm 处检测吸光度以用于数据分析。
注意事项 ：
1.Reagent A 和 Reagent B 为光敏试剂，请避光保存。
2.待测样品中，DTT 或β巯基乙醇浓度不得高于 10μM。
3.待测样品 pH 值需小于 8.5。
4.建议每次使用前用过氧化氢做标准曲线。