产品名称：His-Crystarose FF 6xHis蛋白纯化琼脂糖凝胶填料

　　特性：

　　1、特异性强，非特异性吸附低，用于纯化细胞培养液、细菌裂解液中的6*His标签蛋白，用于大规模纯化;

　　2、超低镍离子泄漏，可以在β-巯基乙醇的存在下纯化蛋白，可用于纯化包涵体以及柱上复性;

　　说明：本产品可用于可溶性表达带6XHis标签蛋白的纯化，也可用于溶解的带6xHis标签的包涵体蛋白的纯化。降低溶液的pH值或者提高溶液中咪唑的浓度可使结合于Ni离子的目标蛋白从琼脂糖介质上洗脱。

　　应用实例：

　　Buffer A(结合缓冲溶液):20mM Tris-cl,300mM Nacl,10mM 咪唑，PH8.0;

　　Buffer B(洗脱缓冲溶液):20mM Tris-cl,300mM Nacl,500mM咪唑，PH8.0;

　　上样流速：100cm/h(AKTA、蠕动泵);

　　洗脱条件：10%B,20%B,50%B,100%B.

　　洗脱流速：150cm/h---300cm/h(AKTA、蠕动泵).

　　注：目的蛋白主要在50%B,10%B洗杂。

　　四、操作步骤：

　　1、 取10mlNi-Crystarose凝胶倒入抽滤器中，用5-10个体积的去离子水抽洗干净，去除残留的乙醇。

　　2、 将清洗干净的凝胶装入1.6 X 20CM层析，柱高3-5cm.

　　3、 螯合NI离子，用浓度为0.1M的硫酸镍以3ml/min的流速冲洗层析柱。

　　4、 平衡，用Buffer A(结合缓冲液)平衡层析柱 2-5 个床体积，流速为5ml/min

　　5、 上样，将细胞破碎上清用0.45μm 滤膜过滤后上样， 流速3ml/min

　　6、 漂洗，用buffer A冲洗层析柱3-5个床体积，流速为 3ml/min

　　7、 洗脱，用分别含有10%B、20%B、50%B、1 00 %B(50mM,100mM,250mM,500mM咪唑)buffer B 进行阶段洗脱，流速为 5ml/min,收集各阶段洗脱峰。

　　6、 去离子水冲洗层析柱 5--10 个柱床体积，再用 20%的乙醇流洗 3 个柱床体积，流速为5ml/min,层析柱充满20%乙醇后可以置于+4~8℃环境中保存。

　　7、再生：填料纯化几次后，需要再生，先用50mM EDTA清洗层析柱5-10个体积，再用0.2M的盐酸和0.2M的氢氧化钠各清洗5个体积，用去离子水冲洗至PH值中性，重新螯合0.5M硫酸镍，用上样缓冲液平衡后即可使用。