M-MLV 逆转录酶 (RNaseH-）
- HMD3301M、HMD3301S、 HMD3301L
- 武汉瀚海新酶
- 湖北省武汉市
- 现货
- 20KU
- 80KU
- 200KU
- 0 元
- 2022-04-30 11:29:18
武汉瀚海新酶生物科技有限公司
一键申请试用
咨询
加入意向单
联系方式
- 关键词
- 逆转录酶M-MLV
M-MLV 逆转录酶来源于莫罗尼鼠白血病病毒（Moloney Murine Leukemia Virus），是一种依赖 RNA 的 DNA 聚合酶，缺少 3′ →5′ 的核酸外切酶活性，通过突变去除了 RNaseH 活性。该酶可利用 RNA（cDNA 合成）或ssDNA 作为模板，合成一条互补的 DNA 链，可应用于第一链 cDNA 合成、第二链 cDNA合成、RNA 引物延伸、RT-PCR、RT-qPCR 和cDNA 文库构建等。
| 组分 | HMD3301S |
| 10 x MMLV Buffer | 500 μL |
| M-MLV 逆转录酶 （RNaseH-） （200 U/μL | 100 μL |
运输与保存方法
≤0℃运输；-20℃保存。
单位定义
以 Poly (rA)·Oligo (dT)为模板/引物，在 37℃，10 min 条件下，掺入 1 nmol 的 dTTP 为酸不溶性物质所需要酶量定义为 1 个活性单位(U)。
质量控制
- 核酸内切酶残留检测：400 U 本酶和 4 μgpUC19 DNA 在 37℃下孵 育 4 h，DNA 的电泳 谱带不发生变化。
- 核酸外切酶检测：50 μl 反应体系中加入 500 U 本酶，1 μM 5’- FAM 标记的寡核苷酸，37℃ 孵育 30 min 无降解信号。
- RNase 残留检测：400 U 的本酶和 0.8 μg MS2 RNA 在 37℃下孵育 1 h，RNA 电泳谱带不发生变化。
| 组分 | 体积 |
| Template RNA | optional |
| Oligo(dT)23（50 μM）or Random Primer Mix（60 μM） | 2 μL |
| dNTP Mix (10 mM each | 1 μL |
| RNase Inhibitor（40 U/μL） | 0.2 μL |
| M-MLV Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
| 10 x MMLV Buffer | 2 μL |
| Nuclease-free Wate | Up to 20 μL |
| Total RNA | 1ng - 1μg |
| Poly(A) RNA | 50 pg - 100 ng |
| 温度 | 时间 |
| 25℃ⓐ | 10 min |
| 42℃-55℃ⓑ | 1 hⓑ |
| 95℃ | 5 min |
ⓐ如使用 Random Primer Mix 增加该孵育步 骤
ⓑ如使用特异性的目的基因引物调整本步骤 温度为 42-55 ℃
ⓒ可在 30-120 min 间调整。延长逆转录时间 有助于获得更长的 cDNA (>5 kb)
