产品介绍

PCR产物回收试剂盒可从PCR反应体系中回收得到不含盐或低盐、不含蛋白质、RNA 等杂质的高纯度DNA 片段。200bp-10kbp的DNA片段回收率 80%以上,并可回收单链、双链 DNA片段以及环状质粒 DNA。回收得到的片段DNA均可直接进行酶切、酶连、测序反应。

PCR产物回收试剂盒组成

一、使用前准备

Buffer PG:开盖后如果长时间未使用,请检查Buffer PG的pH,确保pH≤7.5。

WB: 使用前请将6 ml(5T装)/60 ml(50T装)/240 ml(200T装)无水乙醇加入Buffer WB(试剂瓶上有标签提示)。

二、操作步骤

1.   按照PCR产物:Buffer PG=1:5的比例加入Buffer PG(例如:50 μl PCR反应体系加入250 μlBuffer PG),颠倒混匀。若片段长度小于500 bp,按照1:6的比例加入Buffer PG。

2.   (选做)将装有混合液的EP管转至高速离心机,室温下10,000×g离心30 sec到1min,以甩下吸附在离心管壁的残留溶液,*限度提高回收率。

3.   将上一步得到的混合液添加至本试剂盒提供的吸附柱G柱中(如一次无法加完,可分多次加入),室温下10,000×g离心1 min。弃掉收集管中的废液。如有需要,此步骤可以重复一次,对低浓度的核酸回收率有较。

4.   向吸附柱G柱中加入700 μl Buffer WB ,室温下13,000×g离心1 min ,弃废液。

5.   重复步骤4。

6.   室温下13,000×g离心2 min以彻底甩下Buffer WB的残留。

7.   取出吸附柱G柱并放入新的EP管中,将吸附柱G柱开盖室温下静置2 min,如有需要可放在空调风口吹1-2 min,以彻底去除残留的乙醇。

8.   向吸附柱G柱正中间加入15-50 μl (建议用量为30μl)Elution Buffer或ddH₂O(50℃水浴后的溶解液溶解效果更好),静置5 min待吸附的质粒完全溶解,室温下13,000×g离心2 min即得到回收的DNA片段。

注:回收得到的 DNA可直接用于基因克隆、扩增、测序、酶切等。

三、DNA浓度及纯度

DNA浓度(μg/ml) = OD₂₆₀× 50×稀释倍数,OD₂₆₀/ OD₂₈₀约为1.8-2.0。