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黄曲霉毒素免疫亲和柱
  • LM-118
  • 绿盟
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  • 2023-07-24 17:08:45

江苏绿盟科学仪器有限公司

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黄曲霉毒素免疫亲和柱

简介

    AFT免疫亲和柱适用于基质复杂、限量要求低的样品中黄曲霉毒素B1B2G1G2检测的净化。可以进行TLCHPLCGCLC-MS/MSEIA的定量分析,适用于谷物,食品,饲料等的样品净化过程

柱容量  200ng 黄曲霉毒素

储存条件  2-8冷藏保存,不可冷冻

用途

用于实验室净化样品提取物以进行进一步分析

概要

黄曲霉毒素是谷类及其他农作物常见的霉变菌是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类低分子化合物。污染粮食、油料作物的种子,其中以花生、玉米易被污染,另外在小麦、高粱、巴西坚果、豆类和大米等重要粮食中也经常被检出。

黄曲霉毒素热稳定性很高,一旦产生便难以除去。对动物、植物和微生物具有很强的毒性,致癌力强,还能引起突变和导致畸形。

黄曲霉毒素作为肝癌的三大诱因之一,也是胃癌,肠癌等疾病的主要原因,对人类的健康构成很大威胁。世界各国对食品,饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。

原理

测定的基础是抗原抗体反应,免疫亲和柱中含有和黄曲霉毒素抗体结合在一起的凝胶,样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释,然后缓慢的通过黄曲霉免疫亲和层析柱,在免疫亲和柱内黄曲霉毒素与抗体结合,其他的无关物质不会结合而直接通过免疫亲和柱,之后洗涤免疫亲和柱完全除去没有被结合的其他无关物质。后加入甲醇将黄曲霉毒素释放,然后注入到分析仪器中进行进一步的检测。

提供的试剂

25支/盒免疫亲和柱,规格:1ml/3ml

5  操作者应注意事项

黄曲霉毒素对人体有害,应戴手套操作。

使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液宜用5%浓度的次氯酸溶液浸泡过夜。

不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。

亲和柱于2-8冷藏保存,不可冷冻

使用前,免疫亲和层析柱需回至室温(22~25℃)

操作流程(符合GB/T 18979-2003国标方法)

粉碎好的样品过20目筛并在取样前彻底混合,不立即分析的样品应放在冰箱中储存。

称取20g粉碎样品及4g氯化钠,加入100ml 70%甲醇/水。

高速均质约2分钟,或震荡器震荡约30分钟,

过滤样品至少10ml

10ml滤液加入20ml水,彻底混合。

用玻璃纤维滤纸过滤至澄清,取15ml准备加入到免疫亲和柱中过柱。

10ml注射器连接于免疫亲和柱上端。

处理好的样品液15ml1-2/秒的速度通过免疫亲和柱,弃掉流出的液体。

10ml水淋洗柱子两次,弃掉流出的液体,

利用真空设备压入空气或用注射器吹干柱子中的水。

加入1ml甲醇缓慢洗脱,流速约为2-3秒每滴。

收集全部洗脱液于干净的比色皿或其他容器中用于检测。

7 操作流程图

免疫亲和小柱操作流程

8 液相色谱测定条件

● 激发/发射波长:360nm/440nm

● 流动相:甲醇-水(45+55)

● 流速:0.8mL/min

● 进样量:20ul 

● 柱温:30°

● 反应时间:10min

用进样器吸取20µL黄曲霉毒素标准工作液注入HPLC

色谱仪,在上述色谱条件下测定标准溶液的响

应值(峰高或峰面积),得到黄曲霉毒素B1B2、 

G1G2标准溶液HPLC色谱图

免疫亲和小柱色谱图

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