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pAAV-ZsGreen1-shRNA 腺相关病毒干扰质粒 RNAi 绿色荧光蛋白
  • TSPLA10987
  • 泰斯拓生物
  • 浙江省宁波市
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  • 2023-01-04 14:21:55

宁波泰斯拓生物技术有限责任公司

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产品名称 pAAV-ZsGreen1-shRNA 腺相关病毒干扰质粒 RNAi 绿色荧光蛋白
商品货号 TSPLA10987
商品信息

使用说明 质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必先转化提质粒后使用)


①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;


②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)


③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;


④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)


⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另外不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);


⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。



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