臭氧生物指示剂的使用环境                                                                                                                                                    
361mg/Lm3 臭氧   湿度在90% RH   45分钟  可以杀死99.999%的9372菌  用10的6次方菌种浓度

150mg/m3 左右 臭氧   湿度在90% RH   2小时左右  可以杀死99.9%的菌   用10的3次方菌种浓度,约相当于70PPM .

大家根据自己的环境选择菌种浓度，切记，湿度要控制好，否则臭氧浓度再高也无效哦。

理论：                                                                                                                                                                               

1.金色葡萄球菌的耐菌性比枯草要弱很多   消毒技术规范上有规定   只有枯草被杀灭  才能代表 灭菌完全

 2.所有的灭菌生物指示剂  只有4种菌  ，两种是常用的  7953  9372  ，（ATCC7953嗜热脂肪杆菌芽孢  ATCC9372枯草杆菌黑色变种芽孢）另两款是35021   12980（ATCC35021枯草杆菌变种芽孢 ATCC12980 嗜热脂肪芽孢杆菌） 。
其中9372 用于环氧乙烷 甲醛   臭氧  干热等  ；7953用于121度压力蒸汽   过氧化氢低温等离子灭菌  ；35021用于115度压力蒸汽灭菌 常用于药厂   有些不能121度灭菌 会导致本身物质失活变性  ；12980  是用于过氧化氢低温等离子体灭菌   规范有记载   但不常用。

臭氧灭菌生物指示剂验证方法                                                                  
【产品说明】
    臭氧灭菌生物指示剂由枯草芽孢杆菌黑色变种(ATCC9372)菌片、玻璃管（内装恢复培养基）组成生物指示剂。含菌量不小于1.0×103cfu/片，灭菌时建议相对湿度要大于90%。
【使用范围】
    适用于超净工作台、无菌隔离器的灭菌效果监测和病房内环境空间杀菌、制药/食品车间等的消毒效果监测。
【使用方法】
1、在指定位置放置芽孢菌片袋，进行灭菌。
2、灭菌处理后，将菌片袋移至超净工作台。
3、在无菌净化工作台上，将带有安培瓶的塑料管盖子打开，用镊子将里面的安培瓶取出，把灭菌后                          的菌片用镊子放入塑料管的底部，然后再将安培瓶放入塑料管中，将塑料管盖子盖紧（注意：盖子里面的透气隔菌膜，不要脱落）。
4、用夹具挤压塑料管压破管内的玻璃管（内装恢复培养基）,此阶段吸附芽孢的纸片接触培养液，培养准备完毕。请确认纸片是否浸在培养液中并及时培养。
5、于30℃~37℃培养箱内竖立培养，同时取一片未灭菌的菌片，按上述方法作为阳性对照；
6、培养24-48小时后，判定结果，培养基颜色由原来绿色变成黄色，说明指示剂呈阳性。若培养基颜色保持绿色不变，则指示剂呈阴性。
【结果判定】
1、培养24-48小时后，培养液颜色由绿色变成黄色，说明灭菌不完全，请重新进行灭菌。
2、若培养液颜色保持绿色不变，则可判断灭菌完全。
   (前提条件：阳性对照管经24-48小时培养后，颜色由绿色变成黄色,呈阳性)。
【注意事项】
1、使用前，请确认产品的完整性、且在有效期内使用。
2、请在温度4℃~25℃，相对湿度30%~70%条件下保存，生物指示剂应避免靠近灭火器和化学消毒剂。
3、阳性生物指示剂以及超过有效期的生物指示剂请在灭菌后废弃。
4、确认菌在繁殖后（呈黄色）请不要继续培养。
【生产日期】 2019年7月19日（示例根据实际采购时间为准）
【批    号】 90719
【有 效 期】在说明书规定的条件下，自生产日期起为1年。
卫生许可证号：苏卫消证字（2017）第3205-0039号

需要验证计数的，请参考以下方法：臭氧灭菌生物指示剂菌种培养计数方法                                                                     

1. 在无菌试管内加入5ml含有0.5%吐温-80的0.03mol/L pH7.2磷酸盐缓冲液， 加入适量无菌玻璃珠，将臭氧生物指示剂菌片投入试管，用电动混均器振荡 直至菌片被完全打碎，制成菌悬液。

2.  将无菌试管 3 支分别排列于试管架上，每管加入 4.5ml 含有 0.5%吐温-80 的 0.03mol/L pH7.2 磷酸盐缓冲液，各组由左向右，逐管标上 10-1 、10-2 、10-3 。

3.  将菌悬液样本用电动混匀器混合 20s，或在手掌上用力振打 80 次，随即吸取 0.5ml 加至 10-1 管内。

4.  将 10-1 管依前法用电动混匀器混合 20s，或在手掌上用力振打 80 次，混匀， 再吸取出 0.5ml 加至 10-2 管内。如此类推，直至最后一管，必要时，还可作 某稀释度的 1:1 或 1:4 稀释。

5.  选择适宜稀释度试管（以预计生长菌落数每平板为 15CFU-300CFU 者为宜）， 吸取其中混合均匀的悬液 1.0ml 加入无菌平皿内，每一稀释度接种两个平皿， 一般需要接种 2 个~3 个不同稀释度，

6.  将 40℃~50℃熔化后的培养基，倾注于已加入样液的平皿中，每平皿 15ml-20ml。 7.将平皿盖好，即刻轻轻摇动混匀，平放，待琼脂凝固后，翻转平皿使底向上， 置 37℃±1℃恒温培养箱内培养。 8. 培养至 72h 计数菌落数,一般以肉眼观察，必要时用放大镜检查，以每平板菌 落数在 15CFU-300CFU 的稀释度为准记录结果。 9. 根据稀释倍数和接种量计算每一菌片上的平均菌落数 。     
   
   

7.