经验总结人淋巴细胞分离
【常用分离步骤】
2 用离心管收集血液，并与等量的生理盐水，Hanks液或不含
钙镁的PBS混匀（血液不稀释亦可）；
3 取15mL离心管，加入3mL本品，并将2步骤中的稀释血液缓缓铺加到本品的上层；
注意：铺加血样时建议速度适中，尤其是刚开始时的铺加，避免破坏淋巴细胞分离液与血样的界面。
4 室温下，800g离心20min；
5 离心后，离心管由上到下分为4层： 血浆层-白膜层-人淋巴细胞分离液层-红细胞与粒细胞的沉淀。不用弃去上层液体，用巴斯德管小心吸取白膜层至另一新的离心管中。
注意：由于样本之间的差异，有的血样离心后，仍有部分的红细胞以及粒细胞残留在分离液层中，无法沉淀完全，因此用巴斯德管吸取白膜层的细胞时，尽量少吸取到分离液层中
的液体。
6 用10mL生理盐水，Hanks液或不含钙镁的PBS重悬获得的PBMC，300g离心10min；
7 重复操作步骤“6”一次，沉淀即为PBMC。
【注意事项】
1 本品对光敏感，将本品持续暴露在光照中会使泛影酸钠中的碘离子分离，影响分离效果，但日常的使用过程中，这种影响可忽略不计；
2 若本品储存于冰箱中，那么需将本品恢复至室温后使用；
3 血样的新鲜程度与分离效果关系密切，为了获得最佳的分离效果与细胞活性，最好在取血后2h内进行分离操作，血样的存放时间越长，分离效果越差。
4 由于样本之间的差异，为了获得最佳的分离效果，可能需要调整离心力与离心时间，但通常离心力最大不超过1000g。
【分离方法的局限性】
1分离液利用血液中各细胞密度不同而分离出单个核细胞，但不可避免的，所分离出的单个核细胞含有红细胞和粒细胞，红细胞的量一般不超过5%，粒细胞根据样本不同，残留量有差异。
2由于样本的差异，所分离的单个核细胞数量不是固定的值，需要分别分离后计数，才能得出相应样本的较确切数量。
3该分离液的密度会受到环境温度的一定影响，从而影响分离效果，但通常这种环境温度的影响在可接受的范围内。
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