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BstL DNA 聚合酶
  • HMD7002D、 HMD7002S、HMD7002M
  • 武汉瀚海新酶
  • 湖北省武汉市
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  • 2022-04-30 11:31:55

武汉瀚海新酶生物科技有限公司

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  • BstL

BstL DNA 聚 合 酶 是 在 野 生 型 Bacillus stearothermophilus DNA 聚合酶 I 大片段(BstDNA 聚合酶大片段)的基础上,通过定向进化、理性设计、半理性设计等多轮分子改造进化而来,相比于野生型 Bst DNA 聚合酶大片段,BstL DNA 聚合酶显著提升了扩增速度、产量、耐盐性和热稳定性等性能。BstL DNA 聚合酶具有 5´→3´ 的聚合酶活性和强链置换活性,但没有 5´→3´ 核酸外切酶活性。使用本产品能够大幅度提升环介导等温扩增(LAMP)体系的性能。

注:BstL DNA 聚合酶的贮存液为:10 mMTris-HC(lpH 7.1), 50 mM KCl, 0.1 mM EDTA,1 mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50%甘油。

产品组分

常规浓度

组分 HMD7002S HMD7002M
BstL DNA 聚合酶 (8 U/μL) 100 μL 1000 μL
10×HH BstL Buffer 2.0 mL 2×2 mL
MgSO4 (100 mM) 1.5 mL 2×1.5 mL

高浓度:

组分 HMD7002D
高浓度 BstL DNA 聚合酶(240 U/μL) 25 μL
10×HH BstL Buffer 1×5 mL
MgSO4(100 mM) 2×1.5 mL
BstL Dilute Buffer(Glycerol free) 1 mL
 

应用

1)用于 LAMP 等温扩增体系检测靶标 DNA;

2)与瀚海 RTL 逆转录酶产品联合使用,进行RT-LAMP 等温扩增检测靶标 RNA。

运输与保存方法

0 ℃以下运输,-20 ℃保存。避免反复冻融,产品有效期 18 个月。

活力定义

65 ℃, 30 min 内使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为 1 个活性单位 (U) 。

质量控制

核酸内切酶残留检测:基于 HH BstL 反应缓冲液配制 50 µL 反应体系,其中包含 1 µg 的pUC19 DNA 和 500 U 本酶 ,在 37 ℃下孵育4 小时,由琼脂糖凝胶电泳检测,pUC19 DNA电泳条带没有明显变化。

核酸外切酶残留检测:基于 HH BstL 反应缓冲液配制 50 µL 反应体系,其中包含 1 µg 的 Lambda-HindIII DNA 和 500 U 的本酶,在 37 ℃下孵育 4 小时,由琼脂糖凝胶电泳检测,电泳条带没有明显变化。

RNase 残留检测:基于 HH BstL 反应缓冲液配 制 10 µL 反应体系,其中包含 40 ng 的 MS2 RNA (3500 nt) 和 8 U 本酶 ,在 37 ℃下孵育 16 小时,由琼脂糖凝胶电泳检测,电泳条带 没有明显变化。

大肠杆菌 DNA 残留检测:120 U 本酶中残留 的核酸经E.coli gDNA特异性的TaqMan qPCR 检测,E.coli 基因组残留低于 1 拷贝。

实验流程

1)将 10×HH BstL Buffer 取出,冰上解冻,使 用前涡旋 10 s 混匀,并短暂离心。

2)除模板 DNA 外,其余组分按下表顺序配 制反应混合液。

物质名称 体积 终浓度
10×HH BstL Buffer 2.5 μL 1× (含有 2 mM 镁离子)
MgSO4 (100 mM) 1.5 μL 6 mM (总共 8 mM)
dNTP Mix (10 mM each) 3.5 μL 1.4 mM
FIP/BIP Primers (25×) 1 μL 1.6 μM
F3/B3 Primers (25×) 1 μL 0.2 μM
LoopF/LoopB Primers (25×) 1 μL 0.4 μM
BstL DNA 聚合酶 (8 U/μL) 1 μL 320 U/mL
模板 DNA x μL >10 拷贝
Nuclease-free Water up to 25 μL -
 

3)用移液器吹打混匀,并短暂离心。

4)60-65 °C 恒温孵育 1 h,观察扩增产物。

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