【生化诊断原料酶】肌酸脒基水解酶
肌酸眯基水解酶
Creatine Amidinohydrolase
Creatine + H2O⇉Sarcosine + Urea
酶学性质
最适pH
37℃, buffer solution: pH 6.0-7.5, Na-phosphate;
pH7.5-9.0, Tris-HCl.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
最适温度
10 min-reatcion in Na-phosphate buffer pH 7.5.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
pH稳定性
25℃ , 16 h-treatment with 100 mM buffer solution:
pH 5.0-6.0, Acetate; pH 6.0-7.5, Na-phosphate;
pH7.5-9.0, Tris-HCl.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
热稳定性
10 min-treatment with 100 mM
K-phosphate buffer, pH 7.5.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
稳定性 （-20℃保存）
活性测定方法
原理：肌酸脒基水解酶催化肌酸生成尿素，尿素与对二甲基氨基苯甲醛生成黄色可溶化合物。检测反应液435 nm处吸光度值变化，测定产物生成量。
酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下每分钟催化生成1微摩尔黄色色原所需的酶量。
试剂准备
试剂 I：0.1 M肌酸溶液，（含50 mM 磷酸钠缓冲液，pH 7.5），现用现配。
试剂 II：对二甲基氨基苯甲醛（DAB）溶液，2.0 g DAB溶于100 mL DMSO溶液中，再加入15 mL浓HCl。
试剂 III：酶液，使用50 mM磷酸钾缓冲液pH 7.5稀释到约2-3 U/ml，现用现稀释，冰上存放。
操作步骤
1. 取1 mL试剂 I于5 mL EP管中，37℃预热5 min。
2. 加入试剂 III 0. 1 mL，混匀。
3. 37℃水浴反应10 min后，加入2.0 mL试剂 II终止反应，并在25℃放置20 min。
4. 使用紫外分光光度计，测定反应液在435 nm处吸光度值ODtest。
5. 向反应液中加入0.1 mL 10 mM磷酸钾缓冲液（代替试剂Ⅲ），相同条件下测定吸光度值，设定为空白对照ODblank。
主要用途：用于临床研究中肌酐酶法检测
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